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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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打败番茄炒蛋

新虫 (小有名气)

[求助] 荧光原位杂交FISH 能检测降解质粒的靶基因吗? 已有1人参与

各位大神下午好!
       小硕是环境科学专业的,最近在做降解质粒水平基因转移的平板杂交实验。老板要求把结果用FISH通过激光共聚焦显微镜表示出来。
由于本组从没做过FISH,小硕对几个问题心里没谱,想向大神拜取经验如下:
  1. 要检测位于质粒上的降解靶基因,需要什么样的荧光探针?用寡核苷酸探针的荧光强度能再荧光显微镜下观察到吗?
  2. 什么情况下需要用蛋白酶处理细菌?处理多久、用什么浓度的蛋白酶?
  3. 如果使用300bp的荧光探针,实验步骤上应该怎样加强细胞膜通透性使300bp的片段进入细胞的效率提高?

      求指点,求指教!谢谢!
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天生自弃难丽质
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打败番茄炒蛋

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jiqinger at 2015-07-06 16:38:01
你检测什么基因就用什么基因做探针,蛋白酶是用来消化的,可以增加膜的通透性,具体要用多少,要用多长时间,要自己摸索。

请问探针的大小会不会对其穿透细胞膜有影响呢?如果穿透细胞膜效率低的话,应该减小探针大小还是加大蛋白酶消化时间?
天生自弃难丽质
3楼2015-07-06 19:33:52
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jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
打败番茄炒蛋: 金币+2, ★★★很有帮助, 请问探针的大小会不会对其穿透细胞膜有影响呢?如果穿透细胞膜效率低的话,应该减小探针大小还是加大蛋白酶消化时间? 2015-07-06 17:39:54
你检测什么基因就用什么基因做探针,蛋白酶是用来消化的,可以增加膜的通透性,具体要用多少,要用多长时间,要自己摸索。
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2楼2015-07-06 16:38:01
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