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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 请教不同的样品溶剂是否会影响样品HPLC出峰时间和峰形，为什么呢？
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superwheat

银虫 (正式写手)

[交流] 请教不同的样品溶剂是否会影响样品HPLC出峰时间和峰形，为什么呢？

再做阿霉素的含量测定，用的C18反相柱，流动相是乙腈和pH4的buffer
发现如果阿霉素如果溶解在去离子水里进样，出来一个土包，峰形难看还拖尾，但如果阿霉素溶解在酸性buffer里，峰形好得多。两者出峰时间也差了一分多钟。

我原本以为，样品进了柱子后，药物就和溶剂分开了，药物都是泡在流动向里面，应该状态一致不受样品溶剂影响才对吧？
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1楼 2008-07-30 01:29:29
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fly872

金虫 (小有名气)
★ ★
dnp(金币+2,VIP+0):谢谢应助……
呵呵，看来是个色谱新手哎，并且从来没有学过色谱知识。HPLC出峰时间不仅和样品本质有关，与流动相的关系也是非常大，流动相不同，分离效果也不同。有时间的话，找本色谱的小册子看看，相信你的问题就不会这么.......了，呵呵，好好努力吧.......
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2楼2008-07-30 06:35:47
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song7323

金虫 (正式写手)
★
dnp(金币+1,VIP+0):谢谢参与讨论^_^
HPLC出峰时间不仅和样品本质有关，与流动相的关系也是非常大，流动相不同，分离效果和出峰时间也不同。有酸的流动相出峰收敛，时间也提前（不过也是针对与某个样品）
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3楼2008-07-30 06:51:10
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HPLC9001

金虫 (小有名气)
★
dnp(金币+1,VIP+0):谢谢~~
生物碱类物质加点碱有助于改善峰形拖尾。
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人总是那里来那里去，尘归尘，土归土。
4楼2008-07-30 08:31:52
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hslulili

金虫 (小有名气)

样品溶剂不同会敦色谱峰有影响

★
dnp(金币+1,VIP+0):谢谢~~
我前几天夜作过同类的实验，总是发现蜂型很差，后来换了溶剂就好了
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爱我所爱，选我所选
5楼2008-07-30 11:17:41
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shinebss

金虫 (小有名气)
样品一般都用流动相溶解后进样。
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^^^^^β^^^^^ s s
6楼2008-07-30 13:57:07
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superwheat

银虫 (正式写手)
hehe，抱歉，见笑了，的确第一次要做HPLC，很多东西都不知道。

不过我两次跑HPLC的流动相都是一样的，都是pH4.0的磷酸盐和乙腈。
区别只是在于我配样品的溶剂，第一次用去离子水配样品，峰形很难看，第二次用酸来配样品，就发现峰形和出峰时间都不一样。
引用回帖:
Originally posted by fly872 at 2008-7-30 06:35:
呵呵，看来是个色谱新手哎，并且从来没有学过色谱知识。HPLC出峰时间不仅和样品本质有关，与流动相的关系也是非常大，流动相不同，分离效果也不同。有时间的话，找本色谱的小册子看看，相信你的问题就不会这么... ...

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7楼2008-07-31 14:48:53
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superwheat

银虫 (正式写手)
主要是我要检测组织样品里面的阿霉素含量，我的样品要匀浆和酸沉淀蛋白什么的，所以我就把纯阿霉素样品用相同的，含有Triton和酸的缓冲液来配。是不是这样更合理一些呢？
引用回帖:
Originally posted by shinebss at 2008-7-30 13:57:
样品一般都用流动相溶解后进样。

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8楼2008-07-31 14:51:43
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superwheat

银虫 (正式写手)
非常感谢各位的意见。
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9楼2008-07-31 14:52:01
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wei_wei_1983

木虫 (著名写手)
★
dnp(金币+1,VIP+0):鼓励讨论……^_^
引用回帖:
Originally posted by superwheat at 2008-7-31 14:48:
hehe，抱歉，见笑了，的确第一次要做HPLC，很多东西都不知道。

不过我两次跑HPLC的流动相都是一样的，都是pH4.0的磷酸盐和乙腈。
区别只是在于我配样品的溶剂，第一次用去离子水配样品，峰形很难看，第二次用 ...

由于溶剂和样品相互作用，使样品的极性改变了，所以出峰时间变了
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我们的药学讨论空间http://kitbar.kilu.de/bbs/?fromuid=4 讨论群70414423
10楼2008-07-31 19:06:45
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