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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 蛋白质纯化问题
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bao可雅

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质纯化问题 已有3人参与

现在目前遇到的问题：
1，超滤过程中蛋白质的去除率能够达到多少，有篇文献上，题名“Simplified purification of equine chorionic gonadotropin (eCG) – an example of the use
of magnetic microsorbents for the isolation of glycoproteins from serum”表2中，达到了98%
2.不知道这种酸性蛋白能不能用阳离子交换树脂进行纯化，可是真的有发现，文献比我的蛋白等电点p低的ecg用了阳离子交换树脂，“题名”Extraction of Equine Chorionic Gonadotrophin from Pregnant Mare Plasma by Direct Adsorption on Chromatographic Media“。
3，离子交换介质的上样缓冲液，假如是乙酸钠缓冲液，那洗脱的时候能否使磷酸盐缓冲液。
4，由于活性的测定过程比较麻烦，费钱费力，所以不能更多的尝试方法。
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1楼 2015-06-16 20:54:41
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bao可雅

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by calorimetry at 2015-06-18 14:05:21
如果有人能够在任何一步蛋白质的分离效率（是分离不同种类的蛋白质的效率）能够达到98%，此人完全有资格竞争诺贝尔科学奖。

文献中在超滤之前有一步乙醇提取蛋白质，然后超滤，这两个步骤的蛋白质去除率达到了98%。大神，有用过乙醇提取蛋白质吗
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11楼2015-06-18 21:57:02
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bao可雅

新虫 (小有名气)
自己顶一下，快快来人啊
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2楼2015-06-16 20:59:23
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bao可雅

新虫 (小有名气)
3楼2015-06-16 21:29:17
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
bao可雅: 金币+5 2015-07-06 09:49:25
一步法就能够纯化蛋白质是很难的，除非亲和层析。对于你的蛋白质到底能达到什么效果，还得自己来做才知道。我遇到最极端的情况就是，文献上达到一步纯化，但自己完全做不出来。

等电点在酸性的蛋白质如果用阴离子交换柱层析应该是都能吸附上的，至于是不是用阳离子交换，只要是要看这个蛋白质的pH稳定范围。

洗脱的时候我的习惯用法是用同样的缓冲液。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2015-06-16 21:53:07
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