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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 假阳性筛选
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坏坏坏孩孩孩

新虫 (小有名气)

[求助] 假阳性筛选 已有5人参与

列举两种假阳性筛选的方法，跪求

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-06-16 11:37:16
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我去，你这就是耍流氓呀。各种实验都会有假阳性，谁知道你说的是什么实验。
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2楼2015-06-16 14:24:19
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坏坏坏孩孩孩

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-06-16 14:24:19
我去，你这就是耍流氓呀。各种实验都会有假阳性，谁知道你说的是什么实验。

好吧，就是DNA克隆的那个

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2015-06-16 16:36:41
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
坏坏坏孩孩孩(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-19 20:49:32
1.用通用引物做菌液PCR或菌落PCR，相较于用自己的引物做，假阳性更低。
2.如果插入片段较长，引起载体较大变化，直接提质粒跑电泳，先把大小不对的筛掉，这也是一种降低假阳性的方法。
3.送测序前酶切验证，看产物大小是否与理论值一致。
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4楼2015-06-16 17:20:28
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王冠傑

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
坏坏坏孩孩孩(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-19 20:49:39
酶切验证比菌p出现假阳性概率低多了，通用引物比扩增引物假阳性概率高。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2015-06-16 22:46:20
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yzc937168

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
坏坏坏孩孩孩(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-19 20:49:52
酶切验证，测序验证
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吼吼吼～
6楼2015-06-17 11:19:27
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yangjingjing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
坏坏坏孩孩孩(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-19 20:49:59
插入片段引物和载体引物各一条进行扩增验证，不放心的话再插入片段引物筛选，假阳性可以降低~每次加空载对照
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努力打败一切
7楼2015-06-19 10:32:45
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1、通用引物菌液PCR，观察产物大小；
2、特异引物菌液PCR，观察产物亮度和特异性；
3、抽提质粒，电泳检测，观察大小；
4、抽提质粒，酶切检测；观察酶切片段大小；
5、测序检测，观察克隆片段是否为所需片段；
6、最直接方法，做蓝白斑筛选，蓝色菌斑为假阳性；
。。。。。。
方法很多的，可以单独使用，也可以综合使用，假阳性也不是特别多，一两种方法就可以了，假阳性也不会揪着我们不放的是吧
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没有做不到，只有想不到！
8楼2015-06-19 20:53:24
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