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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pHT43质粒在枯草中的抗性是氨苄还是青霉素啊？
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baronwhy

木虫 (小有名气)

[交流] pHT43质粒在枯草中的抗性是氨苄还是青霉素啊？ 已有2人参与

最近在做枯草，用的pHT43质粒和WB800N宿主菌。
查的文献上步骤一般是在大肠杆菌构建表达质粒，用青霉素抗性筛选，然后转化到枯草WB800N中，用氯霉素筛选；
因为pHT43质粒上带了两个抗性基因，一个是青霉素抗性，一个氯霉素抗性。
当时特意查了下，好像是在革兰氏阴性菌大肠杆菌中表现青霉素抗性，在革兰氏阳性菌枯草芽孢杆菌中表现氯霉素抗性。（好像是因为他们的σ因子不同什么的）
本来也没什么，直到我看到一篇关于枯草表达的文档：B. subtilis Recombinant Protein Expression--Procedures for inducing target gene expression and recombinant protein production in B. subtilis.
其中有这么一段：
1.   Inoculate 5 ml LB media supplemented with 50 ug / ml neomycin, 20 ug / ml chloramphenical and 100 ug / ml ampicilian with WB800N(pHT43TVA-Mj) and
incubate with agitation at 37 C overnight.

在WB800N(pHT43TVA-Mj)的培养时居然也加了青霉素，这让我非常不能理解，如果这也可以的话，那在转化WB800N时不就是可用青霉素筛了么，因为WB800N是不抗青霉素的啊！
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    • 2015-06-15 16:55:36, 73.34 K

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1楼 2015-06-15 16:56:36
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
在枯草中用氯霉素即可
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大家相互帮助哈
2楼2015-06-15 18:47:52
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aoaoshch

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
正常，你说的青霉素是氨苄青霉素，枯草自身会有较高的抗性，100 ug / ml 微不足道。加入的原因可能防止大肠杆菌等杂菌污染。

我自己没有尝试过，猜测的。
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3楼2015-06-17 10:52:38
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