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dzaozao2014

新虫 (初入文坛)

[求助] 柱层析,柱子的选择问题(急) 已有1人参与

大概说一下我的前期试验:放线菌发酵液正丁醇萃取,再用D101大孔树脂(乙醇水做洗脱剂,0%,30%,50%,70%,95%乙醇两倍柱体积洗脱),50%,70%,95%均有活性,分别获得干物质A-500mg,B-200mg,C-200mg。后对以上干物质用氯仿甲醇系统洗脱(从0,10%,20%...100%),1:100上样,选择的柱子有效体积为12mm*22mm。三倍柱体积洗脱。结果:B组份出现从40%-90%几乎都有活性,C组份也是出现类似现象。出现这种情况是不是我的柱子高度过高的原因?
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dzaozao2014

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by GWBST at 2015-06-22 10:36:50
B组份出现从40%-90%中物质组成怎么样,冲柱子,不能着急,我一般都用10个以上柱体积的洗脱剂,理论上柱子长分离效果好。

以前没接触过柱子,以为最多的也就3倍柱体积洗脱。B组份40%-90%物质颜色由深及浅,量也渐渐减少,还没能过液相色谱,下步想过液相看看,想问下上液相的话最少需要多少样品,我收集到的太少了,想把相邻组份合并后再过液相不知道合适不?
4楼2015-06-23 18:34:48
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查看全部 7 个回答

李金杰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dzaozao2014: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-06-23 18:26:35
应该是你的流动相比例有问题,当你想要的物质马上洗脱下来时,你不应该增大流动向的极性,应该已那个比例多洗脱一段时间。既然现在已经失败,可考虑用别的纯化方法继续纯化,例如:凝胶!
2楼2015-06-21 12:15:01
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GWBST

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dzaozao2014: 金币+3, 有帮助 2015-06-23 18:27:00
B组份出现从40%-90%中物质组成怎么样,冲柱子,不能着急,我一般都用10个以上柱体积的洗脱剂,理论上柱子长分离效果好。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

事在人为
3楼2015-06-22 10:36:50
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GWBST

金虫 (著名写手)

先把有活性的部分在TLC板上点样看看化合物是否一致,一致就合起来一起分,不一致再根据情况合并分离。液相上样量根据你的柱子情况定,柱子有个承载量,别过承载量,上样量越大可能分离度越不好。不用着急上yexiang先常规手段纷纷试试
事在人为
5楼2015-06-24 08:00:40
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