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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 柱层析，柱子的选择问题（急）
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dzaozao2014

新虫 (初入文坛)

[求助] 柱层析，柱子的选择问题（急） 已有1人参与

大概说一下我的前期试验：放线菌发酵液正丁醇萃取，再用D101大孔树脂（乙醇水做洗脱剂,0%，30%，50%，70%，95%乙醇两倍柱体积洗脱），50%，70%,95%均有活性，分别获得干物质A-500mg，B-200mg，C-200mg。后对以上干物质用氯仿甲醇系统洗脱（从0，10%，20%...100%），1：100上样，选择的柱子有效体积为12mm*22mm。三倍柱体积洗脱。结果:B组份出现从40%-90%几乎都有活性，C组份也是出现类似现象。出现这种情况是不是我的柱子高度过高的原因？
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1楼 2015-06-15 10:08:30
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李金杰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dzaozao2014: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-06-23 18:26:35
应该是你的流动相比例有问题，当你想要的物质马上洗脱下来时，你不应该增大流动向的极性，应该已那个比例多洗脱一段时间。既然现在已经失败，可考虑用别的纯化方法继续纯化，例如：凝胶！
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2楼2015-06-21 12:15:01
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GWBST

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dzaozao2014: 金币+3, ★有帮助 2015-06-23 18:27:00
B组份出现从40%-90%中物质组成怎么样，冲柱子，不能着急，我一般都用10个以上柱体积的洗脱剂，理论上柱子长分离效果好。
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dzaozao2014
事在人为
3楼2015-06-22 10:36:50
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dzaozao2014

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by GWBST at 2015-06-22 10:36:50
B组份出现从40%-90%中物质组成怎么样，冲柱子，不能着急，我一般都用10个以上柱体积的洗脱剂，理论上柱子长分离效果好。

以前没接触过柱子，以为最多的也就3倍柱体积洗脱。B组份40%-90%物质颜色由深及浅，量也渐渐减少，还没能过液相色谱，下步想过液相看看，想问下上液相的话最少需要多少样品，我收集到的太少了，想把相邻组份合并后再过液相不知道合适不？
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4楼2015-06-23 18:34:48
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GWBST

金虫 (著名写手)
先把有活性的部分在TLC板上点样看看化合物是否一致，一致就合起来一起分，不一致再根据情况合并分离。液相上样量根据你的柱子情况定，柱子有个承载量，别过承载量，上样量越大可能分离度越不好。不用着急上yexiang先常规手段纷纷试试
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事在人为
5楼2015-06-24 08:00:40
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jytryh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

2~3倍的柱体积还是有点少，如果你不想洗脱液体积过大，至少可以在换洗脱剂前爬个板啊
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中医药是中华民族一颗璀璨的明珠
6楼2015-06-24 08:34:18
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dzaozao2014

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by GWBST at 2015-06-24 08:00:40
先把有活性的部分在TLC板上点样看看化合物是否一致，一致就合起来一起分，不一致再根据情况合并分离。液相上样量根据你的柱子情况定，柱子有个承载量，别过承载量，上样量越大可能分离度越不好。不用着急上yexiang先 ...

想问下上液相一般需要多大的样品量才行哈。
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7楼2015-07-13 08:47:53
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