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lxiaxia0519

新虫 (小有名气)

[求助] 双抗夹心法梯度浓度标准品实验结果无变化,求大家帮忙分析原因 已有3人参与

最近做双抗体夹心,一抗通过戊二醛交联在二氧化硅基质上,二抗用荧光素标记。配置一系列标准品抗原浓度,7.8ng/mL--780ng/mL,结果无梯度变化,和空白值(不加抗原,直接加二抗)接近,根据此实验,能否说明抗原抗体之间结合不上?值得一提的是,今年2月份使用该方法时,结果是正常的,已经做出了抗原的浓度线性曲线,从3月份开始响应信号就没有梯度变化了,从同一家公司又买了一批新的抗原,用了几天就又测不到信号了。联系抗原公司后,那边又给发了新的一抗、抗原、二抗,还是测不到信号。抗原抗体都是按说明书上的条件保存的,也没有反复冻融。于是又从别的公司买了一份抗原(固体的),结果依然无梯度变化。
2个月来实验没有一点进展,都快抑郁了,跪求各位前辈帮帮忙给点意见吧!
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lxiaxia0519

新虫 (小有名气)

oo
2楼2015-06-15 10:58:58
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飘逸的云

新虫 (小有名气)

你好,请问你的戊二醛是怎么和二氧化硅基质交联上去的
3楼2015-06-17 15:44:14
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王彬2014

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
估计是你抗体浓度太小,量少,抗原浓度远大于抗体浓度
回顾回想回眸
4楼2015-06-18 08:24:43
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宇文诗畅

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一抗二抗是不是稀释倍数太高了?稀释倍数是多少?
做好自己的事!
5楼2015-10-28 12:00:46
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songbird81

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这里你所提供的信息还是不够具体,需要进行一些对比试验来验证哪里出了问题,但说明一点,以往能做成功,现在做不出来,一定有地方有问题,无非就是四种情况:第一,一抗交联二氧化硅是否有问题??第二:抗原是否有问题?第三,二抗标记荧光素是否有问题??第四,所用的各种Buffer是否有问题??需要用合格的东西,来一一排除验证,我分析,抗原,一抗,二抗变坏的可能性不大,除非你储存不当或使用不当,导致蛋白失活。
6楼2015-10-30 15:47:56
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