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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 细胞单克隆
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洛水东流

新虫 (初入文坛)

[求助] 细胞单克隆 已有4人参与

最近在做细胞单克隆的筛选，就是从一群细胞中跳出来一个细胞，然后培养这一个细胞，让它增值分裂变为无数个，原理是这样，但是至今没有成功，，我把细胞稀释，然后放到96孔板里，但是要么没有，要么有几个，不知道怎么办，已经两个月了，求有经验的，做过的大神指导，求指导求帮助。谢了
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1楼 2015-06-14 21:50:30
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璧月

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
曾经尝试做过。因为细胞状态不好就做了单克隆，就是计算一定体积内一个细胞，分到96孔板里面。
费眼神，超级费眼神。觉得麻烦就等一天两天，细胞长成小团了再看，这样容易些。挑一个孔一个细胞的记录下来。因为细胞很稀，几乎不用换液。
一个细胞长成一大团之后最好孔内传一次，免得长挤了。再次长满之后传到24孔板或6孔板。24孔长满就可以传25cm2的细胞瓶了。
当时的细胞还比较皮实，长得挺快。根据细胞的状况摸索吧。
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2楼2015-06-15 09:17:27
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洛水东流

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 璧月 at 2015-06-15 09:17:27
曾经尝试做过。因为细胞状态不好就做了单克隆，就是计算一定体积内一个细胞，分到96孔板里面。
费眼神，超级费眼神。觉得麻烦就等一天两天，细胞长成小团了再看，这样容易些。挑一个孔一个细胞的记录下来。因为细胞 ...

谢谢

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3楼2015-06-15 20:39:25
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洛水东流

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 璧月 at 2015-06-15 09:17:27
曾经尝试做过。因为细胞状态不好就做了单克隆，就是计算一定体积内一个细胞，分到96孔板里面。
费眼神，超级费眼神。觉得麻烦就等一天两天，细胞长成小团了再看，这样容易些。挑一个孔一个细胞的记录下来。因为细胞 ...

我看显微镜脖子都快掉了，但是每个孔一个细胞的几率太小了，不知道有没有好一点的做法可以提高准确率？

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4楼2015-06-15 20:42:04
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璧月

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
洛水东流: 金币+3, ★有帮助, 谢了 2015-06-16 20:26:11
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4楼: Originally posted by 洛水东流 at 2015-06-15 20:42:04
我看显微镜脖子都快掉了，但是每个孔一个细胞的几率太小了，不知道有没有好一点的做法可以提高准确率？
...

那就等一两天，细胞长成小团了看，低倍大体一看就能看到有没有。毕竟有的细胞虽然贴壁了，但是状态不好，长不起来。状态好的长挺快的，容易判断些。勤快点，多留意，别让细胞长太挤。

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5楼2015-06-16 05:07:30
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siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以尝试用同种细胞使用过的培养基，过滤一下加到96孔板里面，可以帮助细胞生长，也可以在一个60的皿里面种100个细胞，然后等细胞长成聚落，用胰酶定点消化转接到稍微大点的培养环境。
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
6楼2015-06-18 07:58:10
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洛水东流

新虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-06-18 07:58:10
可以尝试用同种细胞使用过的培养基，过滤一下加到96孔板里面，可以帮助细胞生长，也可以在一个60的皿里面种100个细胞，然后等细胞长成聚落，用胰酶定点消化转接到稍微大点的培养环境。

谢了

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7楼2015-06-19 12:35:20
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HAS2323

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有的孔有细胞，有的没有，可能是稀释的方式不对，细胞分布不均匀。 一般都是先计数，再倍比稀释

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8楼2015-06-19 23:52:28
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cuiyongliang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不要怕浪费96孔板，否则就是浪费时间。先大概估计一下细胞数，然后梯度稀释，每个梯度稀释一个板子，最后你认为会是单个细胞的，多稀释块板子。稀释倍数可以是5-10倍。多铺板，肯定有单克隆。
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9楼2015-06-20 00:50:16
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洛水东流

新虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by cuiyongliang at 2015-06-20 00:50:16
不要怕浪费96孔板，否则就是浪费时间。先大概估计一下细胞数，然后梯度稀释，每个梯度稀释一个板子，最后你认为会是单个细胞的，多稀释块板子。稀释倍数可以是5-10倍。多铺板，肯定有单克隆。

恩，谢了

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10楼2015-06-22 00:14:29
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