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[交流]
蛋白质组学的蛋白预处理
本人最近正在进行蛋白质组学相关实验，对于蛋白质的预处理很是头疼，个人总结了本实验中心的预处理方案，希望各路大神给予指导。
1.取动物组织0.1g,加裂解液1ml，粗磨，再加入适量液氮研磨。
2取研磨液冰上混旋45分钟，15000转，4℃离心45分钟。收取上清，上清为蛋白，弃沉淀。（若不是马上做酶解，可以将蛋白样品分装，于－80℃保存备用；冷冻时间尽量短，不超过2周）。
3.加入DTT到蛋白混合物溶液中，保证其终浓度为10 mM， 37℃酶解仪反应60 min后，再加入IAA，保证其终浓度为55 mM，避光，室温反应45 min后
4.加入5倍体积的冰丙酮，沉淀大于等于5小时后，4 ℃离心14000 g×10 min，再将蛋白沉淀重溶于25 mM的ABC溶液中，加入特异性内切蛋白酶trypsin，保证酶：蛋白为1:50（w/w），37℃酶解仪中酶解过夜 ，真空冻干酶解产物。 |
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