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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 改造载体
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wuwenmei

新虫 (小有名气)

[求助] 改造载体 已有3人参与

碰到大麻烦了，老板让我设计一个分泌性表达方案，对载体进行改造，自己的目的序列来自真核生物，富含二硫键，之前试过加SUMO表达，表达量不高，现在的想法是看看能不能加一个信号肽使其分泌到周质或者胞外，不知道各位有没有做过，能不能指点一二，信号肽好多，该怎么选择？启动子应该怎么修改？？请过来人指点一番，谢谢啦，，
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下雨天就算没有伞，我也要学会努力奔跑！
1楼 2015-06-09 21:00:45
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wuwenmei

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by halfbeer at 2015-07-09 09:15:35
为什么一定要设计载体呢，可以用现成的载体，pPIC9K就是分泌型的，也可以表达真核的蛋白

我的蛋白只有5kDA左右，也可以吗？要是行，希望你能惠赠一点给我尝试下，谢谢

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下雨天就算没有伞，我也要学会努力奔跑！
7楼2015-07-10 12:16:24
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跳跳豆芽

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你是如何确定目的蛋白含有二硫键的啊？我的是基因是来自于植物的，表达量也提不上去，pet28b表达几乎都是包涵体，正准备换一个含SUMO的载体
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学无止境
2楼2015-07-08 20:05:54
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wuwenmei

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 跳跳豆芽 at 2015-07-08 20:05:54
你是如何确定目的蛋白含有二硫键的啊？我的是基因是来自于植物的，表达量也提不上去，pet28b表达几乎都是包涵体，正准备换一个含SUMO的载体

以前有分析过这个蛋白

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下雨天就算没有伞，我也要学会努力奔跑！
3楼2015-07-08 20:46:10
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halfbeer

捐助贵宾 (小有名气)

这是啥？

【答案】应助回帖

为什么一定要设计载体呢，可以用现成的载体，pPIC9K就是分泌型的，也可以表达真核的蛋白
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现在我们能做的就是努力努力再努力
4楼2015-07-09 09:15:35
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