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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 酵母做电转时点转杯大小有关系吗
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小橘子2013

新虫 (小有名气)

[求助] 酵母做电转时点转杯大小有关系吗 已有1人参与

最近在做酵母电转化，实验室只有0.4mm点转杯，想问一下需要用多少感受态和线性化后的质粒呢？
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简简单单才是真
1楼 2015-06-08 16:33:14
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-06-09 18:01:15
电火花出现在杯口还是杯内？你的电转参数是如何设置的？你的DNA和感受太是如何制备的？
...

参数是2KV，200Ω，25uf，5s

dna是酶切三小时后用乙醇沉淀的

酵母感受态就是最普通的制备方法 OD600=1.0  收集后水洗两次  山梨醇洗一次 1ml山梨醇重悬 80ul每管分装的
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简简单单才是真
12楼2015-06-10 15:46:14
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
我们一般用0.2的或者0.1的，理论上大点影响也不是很多。

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2楼2015-06-08 19:15:19
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by guoqin_shiyin at 2015-06-08 19:15:19
我们一般用0.2的或者0.1的，理论上大点影响也不是很多。

我是想问 每个大小的杯子都有自己的容量吧  电转的话是都要装满吗  如果感受态和质粒不够的话  需要用什么补齐吗  山梨醇可以吗
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简简单单才是真
3楼2015-06-08 21:09:58
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小橘子2013 at 2015-06-08 21:09:58
我是想问 每个大小的杯子都有自己的容量吧  电转的话是都要装满吗  如果感受态和质粒不够的话  需要用什么补齐吗  山梨醇可以吗...

一般我们不会装满，装200微升就够了。。。。没必要装满，至于质粒，一般体积控制在5微升和酵母混合。。。感受态细胞多少其实不太重要，多点也没关系。酵母很好转

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4楼2015-06-08 21:17:52
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