24小时热门版块排行榜    

查看: 1900  |  回复: 22
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

小橘子2013

新虫 (小有名气)

[求助] 酵母做电转时点转杯大小有关系吗 已有1人参与

最近在做酵母电转化,实验室只有0.4mm点转杯,想问一下需要用多少感受态和线性化后的质粒呢?
回复此楼
简简单单才是真
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小橘子2013

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-06-09 18:01:15
电火花出现在杯口还是杯内?你的电转参数是如何设置的?你的DNA和感受太是如何制备的?
...

参数是2KV,200Ω,25uf,5s

dna是酶切三小时后用乙醇沉淀的

酵母感受态就是最普通的制备方法 OD600=1.0  收集后水洗两次  山梨醇洗一次 1ml山梨醇重悬 80ul每管分装的
简简单单才是真
12楼2015-06-10 15:46:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

我们一般用0.2的或者0.1的,理论上大点影响也不是很多。

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-06-08 19:15:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小橘子2013

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by guoqin_shiyin at 2015-06-08 19:15:19
我们一般用0.2的或者0.1的,理论上大点影响也不是很多。

我是想问 每个大小的杯子都有自己的容量吧  电转的话是都要装满吗  如果感受态和质粒不够的话  需要用什么补齐吗  山梨醇可以吗
简简单单才是真
3楼2015-06-08 21:09:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小橘子2013 at 2015-06-08 21:09:58
我是想问 每个大小的杯子都有自己的容量吧  电转的话是都要装满吗  如果感受态和质粒不够的话  需要用什么补齐吗  山梨醇可以吗...

一般我们不会装满,装200微升就够了。。。。没必要装满,至于质粒,一般体积控制在5微升和酵母混合。。。感受态细胞多少其实不太重要,多点也没关系。酵母很好转

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-06-08 21:17:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见