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pqq226铜虫 (初入文坛)
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SDS-PAGE已有4人参与
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浓缩胶5%,分离胶15%，电泳跑到一半多的位置出现弯曲，条带不直，跑了好多次都是这种情况，样品进行了离心然后取的上清，加样量15微升。请各路大神指点一下，感谢感谢 20150602-6.jpg |
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hajierlove
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5楼2015-06-06 14:59:09
mataomatao
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2楼2015-06-03 20:00:35
恶魔的左眼
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【答案】应助回帖
★ ★ ★
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pqq226: 金币+3, ★有帮助 2015-06-10 09:54:02
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pqq226: 金币+3, ★有帮助 2015-06-10 09:54:02
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这个跑的还算可以的，通常胶跑到最后都或多或少都有些弯曲现象，不过，你的第7条带跑的很好啊，这个加的是什么样品？ 以下是对蛋白表达的SDS-PAGE一些建议： 1. 电泳凝胶浓度选择不当。 2. 低于10Kd 的小分子蛋白质要用Tricine 胶。 3. 靠近前沿的电泳带分辨率不佳。根据分子量与凝胶孔径的关系，选择适当浓度的凝胶。 4. 蛋白质样品水解。注意除去蛋白质样品的内源性的水解酶，不要反复冻融。 5. 电泳时间过长或过短。溴酚蓝达到分离胶的底部即应该关闭电泳电源。 6. 缓冲溶液、SDS 都要新鲜配制。 7. 避免加样过多，提高分辨率。小体积样品可给出窄带，加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样 体积为10-15uL（即2-10ug 蛋白质）。 8. 加热变性后的蛋白质样品要放置到室温即电泳，不要久放，因为蛋白质的二硫键在高温下可能是会断开，但是 暴露于空气中温度降低会重新形成二硫键，而且可能在过久放置过程中蛋白质可能会再折叠，更不要扔到冰箱 里保存。 |
3楼2015-06-05 10:37:48
4楼2015-06-05 13:57:55