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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » SDS-PAGE
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pqq226

铜虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE 已有4人参与

浓缩胶5%,分离胶15%，电泳跑到一半多的位置出现弯曲，条带不直，跑了好多次都是这种情况，样品进行了离心然后取的上清，加样量15微升。请各路大神指点一下，感谢感谢

SDS-PAGE
20150602-6.jpg
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开心最重要
1楼 2015-06-02 16:45:23
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
pqq226: 金币+3, ★有帮助 2015-06-10 09:54:02
这个跑的还算可以的，通常胶跑到最后都或多或少都有些弯曲现象，不过，你的第7条带跑的很好啊，这个加的是什么样品？
以下是对蛋白表达的SDS-PAGE一些建议：
1. 电泳凝胶浓度选择不当。
2. 低于10Kd 的小分子蛋白质要用Tricine 胶。
3. 靠近前沿的电泳带分辨率不佳。根据分子量与凝胶孔径的关系，选择适当浓度的凝胶。
4. 蛋白质样品水解。注意除去蛋白质样品的内源性的水解酶，不要反复冻融。
5. 电泳时间过长或过短。溴酚蓝达到分离胶的底部即应该关闭电泳电源。
6. 缓冲溶液、SDS 都要新鲜配制。
7. 避免加样过多，提高分辨率。小体积样品可给出窄带，加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样
体积为10-15uL（即2-10ug 蛋白质）。
8. 加热变性后的蛋白质样品要放置到室温即电泳，不要久放，因为蛋白质的二硫键在高温下可能是会断开，但是
暴露于空气中温度降低会重新形成二硫键，而且可能在过久放置过程中蛋白质可能会再折叠，更不要扔到冰箱
里保存。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
3楼2015-06-05 10:37:48
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sunfl9091

银虫 (小有名气)
你这个是那家的产品呀
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4楼2015-06-05 13:57:55
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普通回帖

mataomatao

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2015-06-03 20:00:35
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感觉表达量很低呀

[ 发自小木虫客户端 ]
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踏实
5楼2015-06-06 14:59:09
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alexkinglk

银虫 (初入文坛)
跑的挺好的，smile是很正常的。

[ 发自小木虫客户端 ]
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二手的科学家
6楼2015-06-06 16:34:25
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pqq226

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hajierlove at 2015-06-06 14:59:09
感觉表达量很低呀

很低的节奏，所以看不出结果如何
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开心最重要
7楼2015-06-10 09:41:45
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pqq226

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-06-05 10:37:48
这个跑的还算可以的，通常胶跑到最后都或多或少都有些弯曲现象，不过，你的第7条带跑的很好啊，这个加的是什么样品？
以下是对蛋白表达的SDS-PAGE一些建议：
1. 电泳凝胶浓度选择不当。
2. 低于10Kd 的小分子蛋白 ...

非常感谢，发现好多问题我都出现了。。。
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开心最重要
8楼2015-06-10 09:47:38
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pqq226

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sunfl9091 at 2015-06-05 13:57:55
你这个是那家的产品呀

我没懂你什么意思
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开心最重要
9楼2015-06-10 09:52:07
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1510050322

银虫 (初入文坛)
样品没有处理好吧。你处理样品的时候加的什么？
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10楼2015-07-30 18:57:27
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