| 查看: 999 | 回复: 12 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
pqq226铜虫 (初入文坛)
|
[求助]
SDS-PAGE已有4人参与
|
|
浓缩胶5%,分离胶15%，电泳跑到一半多的位置出现弯曲，条带不直，跑了好多次都是这种情况，样品进行了离心然后取的上清，加样量15微升。请各路大神指点一下，感谢感谢 20150602-6.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
投稿返修后收到这样的回复，还有希望吗
已经有7人回复
-
压汞仪和BET测气凝胶孔隙率
已经有4人回复
-
博士申请都是内定的吗？
已经有14人回复
-
博士申请
已经有3人回复
-
谈谈两天一夜的“延安行”
已经有13人回复
-
氨基封端PDMS和HDI反应快速固化
已经有11人回复
-
之前让一硕士生水了7个发明专利，现在这7个获批发明专利的维护费可从哪儿支出哈？
已经有11人回复
-
论文投稿求助
已经有4人回复
-
Applied Surface Science 这个期刊。有哪位虫友投过的能把word模板发给我参考一下嘛
已经有3人回复
-
投稿精细化工
已经有6人回复
hajierlove
铜虫 (正式写手)
- 应助: 44 (小学生)
- 金币: 197.8
- 散金: 130
- 红花: 15
- 沙发: 1
- 帖子: 427
- 在线: 175.7小时
- 虫号: 2346230
- 注册: 2013-03-14
- 性别: MM
- 专业: 生态学
12楼2015-08-07 15:41:20
mataomatao
禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2015-06-03 20:00:35
恶魔的左眼
木虫 (正式写手)
- 应助: 110 (高中生)
- 金币: 2237.7
- 红花: 20
- 帖子: 425
- 在线: 880.6小时
- 虫号: 3705608
- 注册: 2015-03-03
- 专业: 蛋白质组学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
pqq226: 金币+3, ★有帮助 2015-06-10 09:54:02
感谢参与，应助指数 +1
pqq226: 金币+3, ★有帮助 2015-06-10 09:54:02
|
这个跑的还算可以的，通常胶跑到最后都或多或少都有些弯曲现象，不过，你的第7条带跑的很好啊，这个加的是什么样品？ 以下是对蛋白表达的SDS-PAGE一些建议： 1. 电泳凝胶浓度选择不当。 2. 低于10Kd 的小分子蛋白质要用Tricine 胶。 3. 靠近前沿的电泳带分辨率不佳。根据分子量与凝胶孔径的关系，选择适当浓度的凝胶。 4. 蛋白质样品水解。注意除去蛋白质样品的内源性的水解酶，不要反复冻融。 5. 电泳时间过长或过短。溴酚蓝达到分离胶的底部即应该关闭电泳电源。 6. 缓冲溶液、SDS 都要新鲜配制。 7. 避免加样过多，提高分辨率。小体积样品可给出窄带，加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样 体积为10-15uL（即2-10ug 蛋白质）。 8. 加热变性后的蛋白质样品要放置到室温即电泳，不要久放，因为蛋白质的二硫键在高温下可能是会断开，但是 暴露于空气中温度降低会重新形成二硫键，而且可能在过久放置过程中蛋白质可能会再折叠，更不要扔到冰箱 里保存。 |
3楼2015-06-05 10:37:48
4楼2015-06-05 13:57:55