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[交流]
请教：引物设计问题
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请教： 我现在在做一个基因的克隆，用的是简并引物，做PCR时得到了预计的大小的条带，但是最后测序后得到的是单引物扩增。请大家帮一下忙，解决这个问题的方法是什么？是重新设计引物还是继续摸索PCR的条件？ |
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2楼2008-07-22 22:53:09
3楼2008-07-23 09:11:43
4楼2008-07-23 11:30:40
zhang8211jie
铜虫 (小有名气)
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5楼2008-07-27 16:53:39
beckham277
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6楼2008-07-28 00:57:56
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TA克隆 后送测序，TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）即利用Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端。Invitrogen公司TA克隆系统和Topo TA克隆系统都提供一个线性含3`-T突出端的载体用于直接高效地连接PCR产物。系统中也包含感受态细胞和S.O.C培养基, 使得实验操作更为简单方便。 所以TA克隆不需使用含限制酶序列的引物，不需将PCR产物进行优化，不需把PCR产物做平端处理（Invitrogen另有平端载体供高确限度酶克隆）。不需在PCR扩增产物上加接头，即可直接进行克隆。 利用载体上的特异引物测序！！ |
7楼2008-07-28 01:57:44