| 查看: 672 | 回复: 6 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 gzhnsf 的 1 个金币 | |||
[交流]
请教：引物设计问题
|
|||
|
请教： 我现在在做一个基因的克隆，用的是简并引物，做PCR时得到了预计的大小的条带，但是最后测序后得到的是单引物扩增。请大家帮一下忙，解决这个问题的方法是什么？是重新设计引物还是继续摸索PCR的条件？ |
回复此楼» 猜你喜欢
建议基金发布提前给出明确的时间点
已经有13人回复
-
2026国自然函评费到账
已经有7人回复
-
今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果
已经有20人回复
-
科研孤儿太难了
已经有18人回复
-
看来今天不会放榜了？
已经有11人回复
-
时间戳又变了
已经有19人回复
-
filecode，4个jtjc了
已经有14人回复
-
让我中一个面上吧！
已经有13人回复
-
人气不行了
已经有7人回复
-
感觉是下周放榜了
已经有12人回复
2楼2008-07-22 22:53:09
3楼2008-07-23 09:11:43
4楼2008-07-23 11:30:40
zhang8211jie
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 172.9
- 帖子: 131
- 在线: 8.3小时
- 虫号: 257468
- 注册: 2006-06-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学与分子生物学
5楼2008-07-27 16:53:39
beckham277
木虫 (职业作家)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2506.3
- 散金: 38
- 帖子: 3533
- 在线: 13.1小时
- 虫号: 581201
- 注册: 2008-07-18
- 专业: 生物化学
6楼2008-07-28 00:57:56
|
TA克隆 后送测序，TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）即利用Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端。Invitrogen公司TA克隆系统和Topo TA克隆系统都提供一个线性含3`-T突出端的载体用于直接高效地连接PCR产物。系统中也包含感受态细胞和S.O.C培养基, 使得实验操作更为简单方便。 所以TA克隆不需使用含限制酶序列的引物，不需将PCR产物进行优化，不需把PCR产物做平端处理（Invitrogen另有平端载体供高确限度酶克隆）。不需在PCR扩增产物上加接头，即可直接进行克隆。 利用载体上的特异引物测序！！ |
7楼2008-07-28 01:57:44
