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gdhuankai

新虫 (小有名气)

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[交流] 教你如何设计植物组培的培养基配方已有2人参与

　　这里主要讲的是培养基配方的设计，培养基配方是贯穿整个组培体系的核心，对于培养基的配方可以说多种多样，什么奇怪的培养基都有，不同植物，不同培养阶段都会有针对性的培养基。

　　现阶段培养基配方有三种获取方法，我说说它们的优缺点：

　　1. 文献查阅得到的，这种获取方法是最简单的，当然也是最不靠谱的，现阶段国内的研发氛围不是很好，所以有很多文献是滥竽充数的。如果查阅文献，个人推荐优先查阅外国文献，可信度较高，但需要一定文献阅读功底，然后是国内一些比较靠谱的杂志，例如植物生理学通讯、看文献记得看出处，有些杂志名字少见的就看看作个参考就行了，最后还有便是硕博士论文，这些靠谱程度还是可以的，主要是内容充实，实验更加细致。

　　2. 组培企业的配方，如果说最靠谱的配方便是这个了，这些配方基本都是身经百炼的，而且这些配方都是以营利为基准的，所以配方利用程度很高。但是这些配方都是保密的，只能托一定关系才能得到，而且厂方的配方不是绝对固定的，会随情况而变，还有也可以找相关的高校老师获取，当然需要需要一定的关系了。

　　3. 自主设计，自己设计的东西一般都比较靠谱，毕竟自己能看到材料的变化。但是一款培养基的实用程度靠的是时间的积累，需要不停的实验，最后筛选出最好的一款，而且要根据植物以及阶段进行不停的调整，因此自己设计需要更多的耐心和时间。

　　广东环凯这里讲的是自己如何设计一款培养基配方，先写一个培养基配方给大家看看：1/2MS+糖25g/L+琼脂6g/L+活性炭0.5g/L+NAA 0.1mg/L+6-BA 2mg/L+香蕉5% pH5.8，这是一款1L装的石斛兰培养基配方，我们可以划分为几个部分：

　　基本元素液

　　上面说的MS(培养基)，指的是氮磷钾等植物所需要的各种元素，这种元素液有好几种，常用的有MS、B6、N5、花宝1号等几种，各元素液配方间主要的区别在硝态氮和铵态氮的比例，另外就是其他辅助元素的多少和比例区别。这些配方基本晚上都可以找到，广东环凯，在微生物检测培养方面经验丰富，一般很少有做植物组织培养的。

　　碳源

　　就是糖分，组培植物碳源获取方法便是糖份，常用的糖是蔗糖，正规实验室蔗糖都是实验分析纯级别的，价格十分贵，生产厂一般使用食用蔗糖便可以了。除了蔗糖有时还会用到葡萄糖、果糖等糖分，不过价格很高。

　　培养基凝固剂

　　指的是配方里的琼脂，用于使培养基呈凝胶状，我们还可以用到卡拉胶、明胶等。如果是液体培养基可以不需要加。

　　植物生长调节剂

　　一款培养基配方最重要的部分，设计变化最多的地方便是这里，一般包括两种：生长素和细胞分裂素。当然还有一些其他特殊作用的激素，如生长抑制剂等。设计时主要考虑的是，加哪种不加哪种，应该加多少，以及两种激素间的比例是多少。这三个问题是设计时考虑的主要问题。

　　附加物

　　活性炭、香蕉等等都是附加物，这些加了对植物生长有一定作用，但他们的作用机制一直还没弄清楚。

　　pH值

　　就是培养基的酸碱度，一般都是5.8很少会对其进行修改，但是如果遇到一些特殊植物对酸碱度有要求时才会有变动。

　　设计培养基配方简单概括为：将配方的其中一种进行变动，其余不变，同时要设置一个梯度，根据这个梯度观察植物的变化，那种变化符合生产的要求便是最佳值。

　　设计首先可以从元素液开始

　　例如选择不同种元素液，其他不变，观看差异，最后选出适合的元素液，同时相同的元素液还有减少大量元素的情况和去除某些元素的情况，例如：1/2MS就是大量元素减半，设计梯度可以这样：1/4MS、1/3MS、1/2MS、MS;

　　不同的糖分浓度

　　也可以设计出不同的实验组;

　　附加物

　　附加物有很多，例如：土豆、香蕉、椰汁等，任何东西都可以加进去看效果，一般设计时就3个浓度：5%、10%、15%

　　最多的是改变植物激素

　　激素(植物生长调节剂)是培养基设计的主要要点，不同激素及其不同浓度、组合和配比都能对植物产生明显的变化。设计时，可以先参考一些文献，看看其他人使用什么激素，使用什么浓度梯度，再进行自己的设计。

　　一般来说想促进分裂便优先考虑细胞分裂素、想促进生根便考虑生长素、想使植物变粗变壮便考虑矮壮素。

　　设计时还要考虑到激素的组合，植物激素永远不是靠一种激素便能很好的调节的，生长素和细胞分裂素一般都是一起加的。

　　接着是设计浓度梯度，这时你需要考虑激素的使用浓度范围，例如NAA的使用范围是0.1-1mg/L，6-BA则是1-10mg/L，这种范围可以根据文献和一些书本、甚至是百度来查阅。

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