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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切问题
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yydr

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切问题 已有6人参与

为什么我的pet载体与目的片段经双酶切后与目的片段连接，竟然是空载体？双酶切后不是不容易出现空载吗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-05-28 15:46:43
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高洁琼

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先我不知道你是否用软件查看了你选的两种酶在载体中是独一无二的，或者说酶切后的条带是怎样的…你是否进行了对比确认。其次，如果是酶切效率问题，建议分步酶切，首先使用一种酶单切，回收后再用另一种酶单切回收…最后，也有可能是连接效率太低，我不知道你用的是什么连接酶，我是用T4酶连接过夜的。最最后，不知道你在转化时做了阴性对照没，如果对照组中有大量克隆，说明载体自连接泛滥哈，此时转化前要抑制自连接…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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Nothing~seek,nothing~find.
17楼2015-05-30 14:50:49
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-05-28 20:58:39
双酶切也会有酶切不完全的情况，出现空载体也是有可能的，建议你酶切的量稍微少点，然后酶切的时间稍微啦长点，再切胶回收。
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2楼2015-05-28 15:55:04
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-05-28 20:58:47
酶切不完全导致的，这是完全可能的。
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3楼2015-05-28 17:01:41
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yydr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a13515517892 at 2015-05-28 15:55:04
双酶切也会有酶切不完全的情况，出现空载体也是有可能的，建议你酶切的量稍微少点，然后酶切的时间稍微啦长点，再切胶回收。

量少容易回收回来的太暗啊，

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-05-28 22:08:09
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