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tianlizi

新虫 (初入文坛)

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[求助] 怎样从中药中分离出黄酮类化合物？已有5人参与

黄酮类化合物的提取分离常用的方法，洗脱液和层析液的配比，有没有专业的，很急得

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1楼 2015-05-27 13:33:59

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一生随袁

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

黄酮化合物随结构中含糖部分多少分为脂溶性（苷元）和水溶性部分，你可以用70%乙醇回流提取，提取后浓缩回收乙醇，之后水-醋酸乙酯进行萃取，水层主要是黄酮苷类成分，醋酸乙酯部分为苷元部分成分，你可以将这两部分干燥后，初步进行下抗氧化活性研究，看看这两部分那部分抗氧化活性比较高。
如果水层部分活性较高，重点研究水层部分，将水层部分用大孔树脂纯化，分别用水-30%乙醇-50%乙醇-70%乙醇-95%乙醇洗脱，之后你可以将不同洗脱部位做下抗氧化研究，如果50%乙醇活性高作为重点研究部分，可将该部分干燥后，用甲醇溶解，之后100~200目硅胶进行拌样（将样品吸附在硅胶上，此部分硅胶不能用太少，如果上样黏度过大，可能在洗脱过程中发生堵塞柱子），我一般愿意用氯仿-甲醇-水系统，梯度可以从8:2:0.2, 7:3:0.5,6:4:1,5:5:1 这几个梯度洗脱，我个人觉得既然是水溶性的，没必要用氯仿-甲醇 99:1这样的低洗脱溶剂洗脱硅胶柱，收集硅胶洗脱流分，干燥，并点薄层板，将TLC行为一致的流分合并，合并流分你可以选择继续硅胶柱层析，或是用SephadexLH-20纯化，流动相为MeOH（我不习惯用MeOH-H2O系统），流速要慢，之后一步就是ODS-C18纯化，流动相MeOH-H2O，比例自己根据实际情况摸索吧！收集流分，薄层检测，合并TLC行为一致的流分，如果运气好，能析出结晶，如果分子结构中连接糖数较多，不易结晶，就要用到制备液相分离，黄酮化合物是比较好纯化到单体的化合物，得到单体，难度不大，希望楼主要有信心。

至于最初乙酸乙酯萃取部分，可以将乙酸乙酯回收至干燥，甲醇溶解过滤后，硅胶柱色谱纯化，过程同上，进一步也是应用SephadexLH-20（根据极性，可能用到MeOH-氯仿 1:1系统）、ODS-C18纯化、制备液相纯化。