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rmbszla

木虫 (小有名气)

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[求助] 噬菌体滴度测定的一些问题已有1人参与

现在在做噬菌体实验，用的是NEB购买的C7C的随机多肽库。但在测定滴度时，会出现10的8次方一层蓝色，10次方稀释的蓝斑较少，而12,14次方稀释蓝斑会比较多的现象，想咨询一下是什么原因呢？我该怎么解决？
实验步骤主要是：
1. 取过夜培养的菌液 50 μL，加入 5 mL LB液体培养基中，37℃振荡培养至对数生长期（OD600≈0.5）。
2. 融化顶层琼脂，分装 3 mL/管，保温于45℃水浴备用。
3. 用LB培养基将洗脱（或扩增）后的噬菌体进行 10 倍系列稀释。每次稀释都换枪头的
4. 将 10 μL 稀释好的噬菌体加入到 200 μL 对数生长期的宿主菌液中，混匀，室温放置 5 min。
5. 将上述感染菌加入4 mL 顶层琼脂中，快速混匀，倾注于LB/IPTG/X-gal 平板上，37℃培养过夜。

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