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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 求助，已构建好的质粒待转入细胞内后怎样建立敲除细胞系？
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向光生长

禁虫 (知名作家)
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1楼 2015-05-21 16:56:41
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
向光生长: 金币+1, ★有帮助 2015-06-15 10:00:40
你这个是稳转吧！挑选克隆首先要看你的重组质粒是否有荧光标签，有的话，经过一段时间的抗性筛选出现的克隆后，挑选有荧光的克隆，但是为了确保阳性克隆，还要做PCR或Western鉴定；若没有，只能是把所有克隆都挑选出来扩大培养后直接做PCR或Western鉴定，这样可能工作量就会很大
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医学&统计学
2楼2015-05-22 11:20:47
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向光生长

禁虫 (知名作家)
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3楼2015-05-22 12:28:18
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

GFP是绿色荧光啊，转染一段时间之后在荧光显微镜下观察啊，把有绿色荧光的克隆挑出来，然后去鉴定，相反没有荧光的基本就是阴性克隆了
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医学&统计学
4楼2015-05-22 14:41:07
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向光生长

禁虫 (知名作家)
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5楼2015-05-22 14:54:21
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你可以在荧光显微镜下观察，把有荧光的克隆在细胞板上做好记号，然后在超净台里用枪头去挑
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医学&统计学
6楼2015-05-24 19:40:46
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小蚂蚁虫

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
向光生长: 金币+1, ★有帮助 2015-06-15 10:04:14
做个稳转 然后看你载体上是什么抗性 一般来说都是G418
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7楼2015-05-24 20:14:38
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pypsak

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你做的是什么稳转？过表达还是敲除？
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8楼2015-05-25 08:57:34
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yangjingjing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

看下你用的什么载体，一般质粒都有相应说明的，很多可以筛选的
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努力打败一切
9楼2015-05-25 14:08:27
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向光生长

禁虫 (知名作家)
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10楼2015-05-25 14:17:07
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