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好小猫

新虫 (初入文坛)

[求助] hepg2t1细胞长成片,中间一大团白色的 已有1人参与

hepg2t1细胞长成片,中间一大团白色的,刚开始细胞出现好多白色的亮泡,以为就是这样的,或者是细胞长的太多长成几层了,可是这两天发现白色的片越来越多,传代的时候消化7分钟左右,最初的时候细胞基本上都是陈沙状滑落,最近发现消化的时候掉下来的就是白色的鼻涕一样,也吹打不开,只好把肉眼能看到的白色东西吸掉,可是昨天细胞突然成片的翻边了,是死了吗??有两瓶培养液颜色变得像1640的颜色,其中一瓶已经死了,另外一瓶今天用pbs洗了一下,(前两天有两瓶出现黑点,其中一瓶用pbs洗了一下稍微好点,还有一瓶就是今天用pbs洗的,状态不好)

hepg2t1细胞长成片,中间一大团白色的
IMG_0302.JPG
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f9120096

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
好小猫: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-05-19 18:46:45
你细胞传代的时候没有充分吹散,很多细胞聚集在一起了,所以就在原有细胞上又长了一层,后来有死亡了,就程你看到的死亡的细胞团了。
可以肯定的是,你现在照片里的细胞没有染菌,有活细胞,也有死细胞。
翻边的细胞,一般是长满了,或是培养基里面营养跟不上了,再不然就是你培养的时候缺氧了,总之原因很多。需要你继续熟悉整个细胞培养操作流程。
你说的培养基里有鼻涕一样的东西,有可能是细胞过多死亡后的细胞的内脏,哈哈哈,也有可能培养基与细胞代谢后的一些东西。总之吧,勤换液,适当传代。切忌偷懒!

培养细胞不困难。但是要细心,原来我们实验室培养细胞上午看一下,看一下是常规。只要培养细胞,就没整天的假期。

虽然操作不难,但是每一个步骤的操作要到位,同时又不能过分。
2楼2015-05-19 09:00:48
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好小猫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by f9120096 at 2015-05-19 09:00:48
你细胞传代的时候没有充分吹散,很多细胞聚集在一起了,所以就在原有细胞上又长了一层,后来有死亡了,就程你看到的死亡的细胞团了。
可以肯定的是,你现在照片里的细胞没有染菌,有活细胞,也有死细胞。
翻边的细 ...

第一次传代的时候都是比较散的,后来越长越成堆,消化时间没比第一次短,那些成片的东西我不知道是因为消化过度还是说消化时间不够,一次比一次难消化,后来我把那些翻边的重新消化再养,细胞状态越来越差,有个瓶子里面背景很脏,前天只有一瓶要死,第二天原来不错的也不行了,昨天,全部死掉,老师怀疑是支原体污染,死得so快,一点心理准备都没有,养个细胞真心不容易,天天伺候着还死翘翘了。。
3楼2015-05-19 18:45:41
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f9120096

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 好小猫 at 2015-05-19 18:45:41
第一次传代的时候都是比较散的,后来越长越成堆,消化时间没比第一次短,那些成片的东西我不知道是因为消化过度还是说消化时间不够,一次比一次难消化,后来我把那些翻边的重新消化再养,细胞状态越来越差,有个瓶 ...

可是适当的增加一点胰酶的量和浓度。并且在消化前,用PBS把细胞洗干净一些,这样胰酶的效果就会好很多。还有,消化的时候要在培养箱中,保温。刚开始如果不知道消化的程度,可以不时的用显微镜观察消化程度。
其实养肿瘤细胞挺简单的。给点吃的就活。只要不污染。
4楼2015-05-20 08:44:39
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zhangyoujian

金虫 (小有名气)

HepG2细胞的确喜欢聚团生长,我最近也在养这个细胞,我都用0.25%胰酶(不含EDTA)消化8分钟,用15%FBS(GIBCO),就这样还养不好。楼主的细胞还可以,我的就不太好了,传几代后细胞就开始崩解,总感觉是营养跟不上,细胞饿死了,所以我每天换液,希望它能好好活。
5楼2015-12-28 15:34:18
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