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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于实验中可变剪切的一些问题
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lwk5716: 金币+5 2015-05-18 19:18:19
引用回帖:
10楼: Originally posted by lwk5716 at 2015-05-18 12:59:54
以后想看一下，这种较少的可变剪切对植物的作用是什么，在研究小麦抗旱中找到的。
...

如果想在这里探究一下那就得用干旱胁迫一下小麦看剪切部分的表达量差异了~~如果有所关联可以写一篇小论文了。不错~
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大家相互帮助哈
11楼2015-05-18 13:55:10
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-05-18 13:55:10
如果想在这里探究一下那就得用干旱胁迫一下小麦看剪切部分的表达量差异了~~如果有所关联可以写一篇小论文了。不错~...

谢谢你的回答。
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12楼2015-05-18 19:18:44
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随风追梦

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-05-19 22:48:57
（用cDNA扩增），电泳发现只有一条带，切胶回收后连接T载体，挑菌测序，发现有些片段少了一个内含子——这里如果有内含子，那么含内含子的事一种mRNA,不含的是另一种，这样来说应该是可变剪切；我之前做Race，克了20多个基因吧，也出现3个两种片段的，差别也都不大……不过我的都是在末端差异……有很多种，也挺费解的，Race我做了半年，感觉疑惑挺多的。
“扩增后跑1%或2%琼脂糖胶只能看到一条带，可变的那条带比目的大小少100多bp，但是胶上就看不到那条带，这是怎么回事啊？”如果条带比较大，比如超过2000bp，那么个人认为100bp的差异在琼脂糖中看不出来应该比较正常，我之前克基因的时候，单条带连接转化后，挑菌菌落PCR经常会有分不出的差异……当然不是同一泳道，个人感觉或许你可以试试PAGE……
如有不当请见谅……
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初心不改！
13楼2015-05-18 20:44:56
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 随风追梦 at 2015-05-18 20:44:56
（用cDNA扩增），电泳发现只有一条带，切胶回收后连接T载体，挑菌测序，发现有些片段少了一个内含子——这里如果有内含子，那么含内含子的事一种mRNA,不含的是另一种，这样来说应该是可变剪切；我之前做Race，克了2 ...

谢谢你的回答，目的带大小大约1300bp，也用过PAGE但是还是看不出两条带，有可能另一条带太浅了，片段差异在末端。下一步就是想看看，不同条带的生理意义，转转基因啥的。
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14楼2015-05-19 18:11:16
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