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永峰1230

铜虫 (小有名气)

[求助] 做WB,用DAB显色,显色时有印迹,膜干了就没了 已有2人参与

做WB, 使用DAB显色:   2ml甲醇溶解 6mg 4-CN, 2mg DAB,  10ul  30% 双氧水,  加PBS补至10ml。    显色后,几分钟 出现条带,因为我的蛋白含量少。 条带看着比较淡,,有过了几分钟,条带还是那么淡,而且 整个膜,开始背景色加深。。 因此,终止显色。。  加水,洗了洗膜。。  还是有条带的,比较淡。。  把膜放在37℃ 培养箱里,烘干。。  烘干之后,就没有条带了。。。。   再让入水里,又显现出条带,还是那么淡,,但是这样不能拍照。。。。不能拿出去给人看。。这个怎么回事呢???

改怎么改进呢?

下面是图片,用手机拍的可能不清晰,,改了一下色阶,能看到条带

做WB,用DAB显色,显色时有印迹,膜干了就没了
手机拍照.jpg


做WB,用DAB显色,显色时有印迹,膜干了就没了-1
原图调了色阶.jpg
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永峰1230

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 永峰1230 at 2015-05-18 20:18:32
嗯嗯。。好的。。过两天我再试一试。这两天没有再做
...

又做了一次。。蛋白浓度可以。。显色后也有。。当时是晚上,第二天颜色变淡很多。。到下午就基本上看不到了…………

[ 发自小木虫客户端 ]
12
4楼2015-05-23 22:24:33
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查看全部 5 个回答

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
主要问题可能还是你的蛋白太少了,尝试用超滤管一类的做个浓缩吧,以不浓缩的蛋白作为阴性对照~

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

大家相互帮助哈
2楼2015-05-16 00:27:14
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永峰1230

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-05-16 00:27:14
主要问题可能还是你的蛋白太少了,尝试用超滤管一类的做个浓缩吧,以不浓缩的蛋白作为阴性对照~

嗯嗯。。好的。。过两天我再试一试。这两天没有再做

[ 发自小木虫客户端 ]
12
3楼2015-05-18 20:18:32
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shilohbaby

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也是用的DAB显色,显色完成后,立马用纸将膜擦干,然后放到扫描仪上采集图像。采集完图像,把膜放到PE手套里保存,但是过几天去看,基本上没有显色了。可见DAB显色室温干燥的条件下不能长期保存,要及时保存图像。
5楼2016-01-06 10:11:00
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