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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA提取时，浓度4252.2，A260/280=1.99，但电泳跑不出RNA，原因是？
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依然自然

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by mataomatao at 2015-05-13 20:25:25
能够证明提取的是RNA？如果做核磁采个P谱还差不多；仅仅是紫外，有DNA等或者降解的RNA，蛋白，色素等污染跑胶不正常；是可以理解的

实验室没有核磁采个P谱的条件，还是谢谢你哈！
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生命就如旅行。。。。所以要一直笑着
11楼2015-05-14 09:47:21
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blackapple3731

木虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 依然自然 at 2015-05-14 09:46:05
1.提取的时候，直到最后一次的75%乙醇水洗都还能看到小块的乳白色的沉淀。
2.有在找有关CTAB提取的方法。
3.初提还不直到能稀释在跑胶、点样的，请问你说的稀释是冰上直接用DEPC水稀释，还是得加DEPC水再水浴溶解 ...

Marker 很亮 说明不是电泳槽的问题，点样的时候，混合一点loadingbuffer，可能是乙醇没晾干，RNA有点飘
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其实我的专业是海洋化学
12楼2015-05-14 09:50:50
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没提出来，总RNA离心以后是在管壁上的，洗时光洗底部是不够的，要整个管都洗到位。
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采菊东篱下，悠然见南山。
13楼2015-05-14 11:42:12
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luwei13566

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 依然自然 at 2015-05-14 09:46:05
1.提取的时候，直到最后一次的75%乙醇水洗都还能看到小块的乳白色的沉淀。
2.有在找有关CTAB提取的方法。
3.初提还不直到能稀释在跑胶、点样的，请问你说的稀释是冰上直接用DEPC水稀释，还是得加DEPC水再水浴溶解 ...

就你点样用的那个RNA样品稀释，比如吸出来1ul，再加9ul的DEPC处理水或者是Rnase free water，就等于稀释了10倍。
这会仔细看了看你的图，发现其实你额胶中间还是有微弱的RNA带的，但重点是从点样孔拖尾，点样孔被堵的可能性很大~但也不排除RNA被讲解的可能。
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大家相互帮助哈
14楼2015-05-14 20:34:11
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小蚂蚁虫

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
按照我们的说法就是没有提出来
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15楼2015-05-14 22:18:09
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peng1997

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用TRIzol plant 或CTAB 或多糖多酚植物总RNA提取试剂盒
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16楼2015-05-15 11:14:51
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ouyangxian

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
请问你电泳的时候电泳液是新配的吗？不确定你是不是跑胶的时候降解了
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17楼2015-05-15 16:38:26
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genebiotech

捐助贵宾 (初入文坛)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
蛋白污染严重，或者重新配电泳液再试一下
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18楼2015-05-19 01:52:54
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jinghun2004

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

目测基因组和多糖比较多，第二张图中能隐约看到RNA18S条带；关于稀释：如提取的RNA较纯，电泳上100ng就足够能看到条带，但是就你的电泳图来看，RNA含量很低。
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19楼2015-05-19 10:34:09
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by mataomatao at 2015-05-13 20:25:25
能够证明提取的是RNA？如果做核磁采个P谱还差不多；仅仅是紫外，有DNA等或者降解的RNA，蛋白，色素等污染跑胶不正常；是可以理解的

要是提个RNA都得做MRI，那做分子生物实验的同学们都要跪了。紫外分光光度计，电泳，RT-PCR个个都能证明提出来的是不是RNA。

楼主电泳没跑好啊，第一个图Marker都没跑开就不说了，第二个图Marker用的是啥？普通琼脂糖胶跑RNA，最好用DL2000 DNA Marker，胶用0.8~1.2%，28S rRNA跑的位置和2000bp差不多。

前面有人答说上样量太大，建议稀释，我觉得很有道理。4.5ug/uL啊，这浓度！一般用个300-400ng跑电泳就能看得比较清楚了。

另外就是试试CTAB法，或者买个植物总RNA提取试剂盒。
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20楼2015-05-19 10:41:35
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