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流式细胞仪使用手册（中文版）
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仪器类型：BD FACSCalibur 目录： 第一章 流式细胞仪简介...............................................................................................1 1.1 流式细胞术发展史...........................................................................................1 1.2 流式细胞仪构造和工作原理...........................................................................2 1.2.1 概述.........................................................................................................2 1.2.2 流式细胞仪构造.....................................................................................2 1.3 流式细胞仪的主要技术指标.........................................................................10 第二章 FACSCalibur 的日常操作...............................................................................12 2.1 FACSCalibur系统...........................................................................................12 2.2 FACSCalibur开机程序...................................................................................15 2.3 FACSCalibur关机程序...................................................................................16 2.4 FACSCalibur的维护与保养...........................................................................17 2.4.1 FACSCalibur的每月维护......................................................................17 2.4.2 FACSCalibur的定期维护......................................................................18 2.5 常见故障排除.................................................................................................20 第三章 FACSComp软件..............................................................................................22 3.1 FACSComp简介.............................................................................................22 3.1.1 FACSComp运行条件............................................................................22 3.1.2 FACSComp的文件类型........................................................................23 3.2 FACSComp的功能.........................................................................................24 3.2.1 光电倍增管（PMT）电压的调节.......................................................24 3.2.2 荧光补偿的调节...................................................................................24 3.2.3 灵敏度的测试.......................................................................................24 3.2.4 时间延迟的校准（对于双激光，配有FL4 PMT）............................25 3.2.5 HLA-B27的校准...................................................................................25 3.2.6 LeucoCOUNT........................................................................................25 3.2.7 优化.......................................................................................................25 3.3 FACSComp的运行.........................................................................................25 3.3.1 CaliBRITE Beads的准备.......................................................................25 3.3.2 软件环境的设置...................................................................................26 3.3.3 Beads的检测..........................................................................................26 3.3.4 Optimization..........................................................................................28 3.4 Troubleshooting...............................................................................................28 第四章 FACStation 数据管理系统..............................................................................30 4.1 FACStation 数据管理系统组成.....................................................................30 4.2 FACStation文件组成......................................................................................31 4.2.1 如何建立文件夹...................................................................................31 4.2.2 FACStation文件的类型.........................................................................31 4.2.3 如何管理文件.......................................................................................32 4.3 实用的Macintosh OS X功能........................................................................34 4.3.1 菜单栏...................................................................................................35 4.3.2 Dock.......................................................................................................37 4.3.3 查找窗口...............................................................................................37 4.3.4 键盘快捷键...........................................................................................38 4.4 如何设置模版.................................................................................................39 4.5 实验练习：如何将ModFit LT的别名添加到Dock菜单下...........................40 4.6 可选性存储装置.............................................................................................40 4.6.1 可选性存储装置的基本工作原则.......................................................40 4.6.2 光驱的维护...........................................................................................41 4.6.3 光盘的维护...........................................................................................41 第五章 CellQuest Pro软件...........................................................................................42 5.1 概述.................................................................................................................42 5.1.1 获取(Acquisition）................................................................................42 5.1.2 分析(Analysis).......................................................................................42 5.1.3 从获取到分析(Acquisition Analysis)..................................................42 5.2 工具栏.............................................................................................................42 5.3 CellQuest Pro 的文件.....................................................................................43 5.3.1 FCS数据文件........................................................................................43 5.3.2 实验文件...............................................................................................44 5.3.3 仪器条件文件.......................................................................................44 5.3.4 统计文件...............................................................................................44 5.4 CellQuest Pro 的仪器控制.............................................................................44 5.4.1 探测器...................................................................................................45 5.4.2 放大器...................................................................................................45 5.4.3 阈 值......................................................................................................46 5.4.4 补 偿......................................................................................................46 5.4.5 状 态......................................................................................................47 5.5 CellQuest Pro 的视图.....................................................................................48 5.6 练习：3色或4色数据获取.............................................................................48 5.6.1 质控－运行FACSComp........................................................................48 5.6.2 优化.......................................................................................................50 5.6.3 调出储存的由FACSComp 生成的仪器条件.......................................52 5.6.4 调节FSC/SSC探测器（电压）及FSC阈值.........................................53 5.6.5 设置淋巴细胞Region...........................................................................53 5.6.6 调节FL1、FL2、FL3的探测器（电压）...........................................53 5.6.7 调节荧光补偿.......................................................................................55 5.7 实验练习：3色/4色预获取............................................................................55 5.7.1 设置Acquisition & Storage 窗口...........................................................56 5.7.2 设置Parameter Description....................................................................57 5.7.3 编辑Reagent Panel.................................................................................58 5.8 实验练习：数据获取.....................................................................................59 5.9 储存、恢复仪器设置.....................................................................................60 5.9.1 储存仪器设置.......................................................................................60 5.9.2 恢复仪器设置.......................................................................................60 5.10 储存实验模板文件.......................................................................................60 5.11 练习：数据分析...........................................................................................60 5.11.1 画Region..............................................................................................61 5.11.2 限定象限marker..................................................................................61 5.11.3 分析四色..............................................................................................63 5.11.4 批分析其余数据..................................................................................63 5.11.5 分析数据..............................................................................................64 5.11.6 将分析文件以模板形式保存..............................................................64 5.11.7 创建文具簿（stationery pad）...........................................................64 5.11.8 将统计改为电子表格..........................................................................65 5.12 Regions 和Gating（画门）..........................................................................65 5.12.1 设置Region..........................................................................................65 5.12.2 改变Region..........................................................................................65 5.12.3 用Region 统计来分析数据.................................................................66 5.12.4 门.........................................................................................................66 5.12.5 多色门.................................................................................................66 5.12.6 组合门.................................................................................................67 5.12.7 在直方图上使用组合门分析.............................................................68 第六章 FACSCalibur 分选...........................................................................................69 6.1 分选概述.........................................................................................................69 6.1.1 收集系统...............................................................................................69 6.1.2 分选模式...............................................................................................70 6.2 分选窗口.........................................................................................................71 6.2.1 Sort Setup...............................................................................................71 6.2.2 Sort Counters.........................................................................................72 6.3 准备收集管.....................................................................................................72 6.4 分选.................................................................................................................73 6.4.1 清洗分选管线.......................................................................................73 6.4.2 准备.......................................................................................................73 6.4.3 收集分选前数据...................................................................................74 6.4.4 分选条件设置.......................................................................................74 6.4.5 分选目的细胞.......................................................................................74 6.4.6 清洗分选管路.......................................................................................75 6.4.7 浓缩样本...............................................................................................76 6.5 检验分选纯度.................................................................................................76 6.6 分选问题讨论.................................................................................................77 6.7 FACSCalibur无菌分选...................................................................................79 6.8 分选细胞浓缩系统.........................................................................................80 6.8.1 系统简介................................................................................................80 6.8.2 细胞培养基嵌入物和滤膜的制备.......................................................81 6.8.3 确定气压参数........................................................................................82 6.8.4 如何用细胞浓缩系统进行分选............................................................82 6.8.5 分选浓缩细胞.......................................................................................84 6.8.6 从分选管路中回收细胞.......................................................................84 6.8.7 回收细胞做进一步分析.......................................................................85 6.8.8 清洗分选管路.......................................................................................85 6.8.9 清洗浓缩器...........................................................................................85 第七章 DNA分析.........................................................................................................87 7.1 概述.................................................................................................................87 7.2 细胞周期.........................................................................................................87 7.3 DNA检测的常用术语....................................................................................87 7.3.1 Coefficient of Variation（CV）：变异系数........................................87 7.3.2 DNA index（DI）：DNA指数............................................................88 7.3.3 Ploidy：倍体.........................................................................................88 7.4 影响流式DNA分析的因素............................................................................88 7.4.1 分辨率（CV）......................................................................................88 7.4.2 线性度...................................................................................................88 7.4.3 碎片.......................................................................................................88 7.4.4 细胞双粘体...........................................................................................89 7.5 DNA质量控制（DNA QC Particles）..........................................................89 7.5.1 样本制备...............................................................................................89 7.5.2 上机检测...............................................................................................89 7.5.3 常见错误排除.......................................................................................90 7.6 用CellQuest Pro软件获取DNA 数据.............................................................91 7.6.1 样本制备...............................................................................................91 7.6.2 用CellQuest Pro软件上机获取数据.....................................................92 7.6.3 质量控制...............................................................................................95 7.7 用ModFit 软件分析DNA数据.......................................................................95 7.7.1 运用ModFit 进行自动分析..................................................................96 7.7.2 运用ModFit 进行手动分析..................................................................96 7.7.3 运用ModFIT进行同步化分析..............................................................98 7.7.4 运用ModFIT 进行增殖分析.................................................................98 第八章 HLA-B27分析.................................................................................................99 8.1 检测HLA-B27的意义.....................................................................................99 8.2 HLA-B27的检测方法.....................................................................................99 8.2.1 传统方法...............................................................................................99 8.2.2 流式细胞术.........................................................................................100 8.2.3 试剂盒介绍.........................................................................................100 8.2.4 实验原理.............................................................................................100 8.2.5 样本的收集和准备.............................................................................101 8.2.6 流式检测.............................................................................................102 8.3 质量控制.......................................................................................................110 附录1： 组织相容性抗原和疾病的关系........................................................... 111 附录2：强直性脊柱炎——一个常见但易被忽略的疾病................................112 第九章 MultiSET软件........................................................................................113 9.1 简介...............................................................................................................113 9.2 MultiSET运行条件.......................................................................................114 9.3 MultiSET文件类型.......................................................................................115 9.4 MultiSET软件内容.......................................................................................116 9.4.1 MultiSET界面功能分区.....................................................................116 9.4.2 MultiSET命令菜单.............................................................................116 9.4.3 MultiSET实验报告.............................................................................117 9.4.4 MultiSET运行程序.............................................................................117 9.5 利用Multiset软件的Tools和Preferences......................................................126 9.6 Control Panels (绝对计数质控)....................................................................128 9.7 MultiSET画门及Attractor方案.....................................................................128 9.8 注意事项及常见问题处理...........................................................................129 |
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