24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 349  |  回复: 4
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 silentguy 的 4 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

silentguy

铜虫 (小有名气)

[交流] 请教关于双向电泳

前几天第一次做双向电泳染色后发现啥也没有,换了一种染色方法还是没有,故排除染色问题。  又怀疑是等电聚焦出错,于是只用marker跑第二向,结果胶上还是很干净没有任何蛋白点。  这样我就觉得是第二向电泳有问题。每次只跑一块胶,原先的设置是10mA  80V  1W  1小时;390mA  600V  78W 6小时。(因为上层缓冲液槽漏液,故将电压电流设得都很大)。  后来发现没有结果,就将设置改为教程上所说的 10mA 80V  1W  1小时;12mA  150V  3W 6小时。 还是什么都没有。真奇怪。感觉步骤很简单啊,怎么会这样呢?  
我用的是Amersham 的电泳系统。哪位高人给点意见吧?谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界

10mA  80V  1W  1小时;390mA  600V  78W 6小时???
我的印象中是等电聚焦的时间长呀?等电聚焦一般都是过夜的,还得控制电泳的温度?而第二方向的电泳基本上和普通的PAGE胶电泳没什么大的区别。你没有搞反了两次电泳的设置吧?
不必分享金币,也许不会解决你的问题。
位卑未敢忘忧国。
5楼2008-07-14 01:16:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

merlynhuang

金虫 (小有名气)


silentguy(金币+1,VIP+0):非常感谢,恳请给点建议,呵呵
第二向,390mA  600V  78W 6小时???!!
12mA  150V  3W 6小时???!!
你是多大的胶?如果是小胶,估计早就跑出胶外了
重新泡论坛,才找回做实验的感觉
2楼2008-07-13 17:29:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silentguy

铜虫 (小有名气)

24cm的胶,呵呵,因为上层缓冲液槽漏液,所以咨询了一下GE的技术人员,人家说要把电压什么的调到最大,我也不记得电流和功率要不要调,就都调了。

弱问一般如何设置呢?12mA  150V  3W 应该是不大吧,这是over night 的设置了。

[ Last edited by silentguy on 2008-7-13 at 19:22 ]
3楼2008-07-13 19:20:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

merlynhuang

金虫 (小有名气)

24cm的胶我没跑过,我认为首先考虑是上样量因素,如果太低的话,可能有些染色方法检测不到,当然如果排除染色液,电泳缓冲液问题,你要注意的是胶条与PAGE胶之间是否有气泡。还有我不赞成大电压跑,发热问题很严重。即便是有斑点,都可能出现横条纹和纵条纹。 好好的装板子,应该不会漏液,再一个注意下电极是否正确。

金币就不用了,可能这些因素没一条对,如果可以,下次把照片发上来。
重新泡论坛,才找回做实验的感觉
4楼2008-07-13 22:23:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 331环境科学与工程求调剂 +3 熠然好运气 2026-03-27 3/150 2026-03-28 04:11 by fmesaito
[考研] 295材料工程专硕求调剂 +6 1428151015 2026-03-27 6/300 2026-03-28 03:51 by fmesaito
[考研] 一志愿上海理工能源动力(085800)310分求调剂 +3 zhangmingc 2026-03-27 4/200 2026-03-27 19:01 by 给你你注意休息
[考研] 求调剂 +4 零八# 2026-03-27 4/200 2026-03-27 18:07 by yu221
[考研] 化学调剂 +4 爱吃番茄的旭 2026-03-24 5/250 2026-03-27 17:50 by kiokin
[考研] 材料与化工085600,总分304,本科有两篇sci参与,求调剂 +10 幸运的酱酱 2026-03-22 12/600 2026-03-27 16:08 by muchong357
[考研] 07化学280分求调剂 +10 722865 2026-03-23 10/500 2026-03-27 15:51 by Plutoqq
[考研] 274求调剂 +17 顾九笙要谦虚 2026-03-24 23/1150 2026-03-27 15:16 by caszguilin
[考研] 复试调剂,一志愿南农083200食品科学与工程 +5 XQTJZ 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:49 by 狂炫麦当当
[考研] 339求调剂 +4 烤麦芽 2026-03-27 5/250 2026-03-27 13:23 by 752105528
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +5 Ong3 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:24 by goldfish51
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +6 kongweilin 2026-03-26 8/400 2026-03-27 10:18 by FF_16
[考研] 359求调剂 +4 王了个楠 2026-03-25 4/200 2026-03-27 08:43 by 不吃魚的貓
[考研] 0703化学求调剂 +3 丹青奶盖 2026-03-26 5/250 2026-03-26 20:11 by macy2011
[考研] 一志愿哈工大,085400,320,求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +7 niko- 2026-03-22 7/350 2026-03-25 20:14 by qingfeng258
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
信息提示
请填处理意见