应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教关于双向电泳
51/1返回列表
查看: 433  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 silentguy 的 4 个金币

silentguy

铜虫 (小有名气)

[交流] 请教关于双向电泳

前几天第一次做双向电泳染色后发现啥也没有，换了一种染色方法还是没有，故排除染色问题。  又怀疑是等电聚焦出错，于是只用marker跑第二向，结果胶上还是很干净没有任何蛋白点。  这样我就觉得是第二向电泳有问题。每次只跑一块胶，原先的设置是10mA  80V  1W  1小时；390mA  600V  78W 6小时。（因为上层缓冲液槽漏液，故将电压电流设得都很大）。  后来发现没有结果，就将设置改为教程上所说的 10mA 80V  1W  1小时；12mA  150V  3W 6小时。 还是什么都没有。真奇怪。感觉步骤很简单啊，怎么会这样呢？  
我用的是Amersham 的电泳系统。哪位高人给点意见吧？谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-07-13 17:00:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

merlynhuang

金虫 (小有名气)
★
silentguy(金币+1,VIP+0):非常感谢，恳请给点建议，呵呵
第二向，390mA  600V  78W 6小时？？？！！
12mA  150V  3W 6小时？？？！！
你是多大的胶？如果是小胶，估计早就跑出胶外了
赞一下(1人) 回复此楼
重新泡论坛，才找回做实验的感觉
2楼2008-07-13 17:29:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silentguy

铜虫 (小有名气)
24cm的胶，呵呵，因为上层缓冲液槽漏液，所以咨询了一下GE的技术人员，人家说要把电压什么的调到最大，我也不记得电流和功率要不要调，就都调了。

弱问一般如何设置呢？12mA  150V  3W 应该是不大吧，这是over night 的设置了。

[ Last edited by silentguy on 2008-7-13 at 19:22 ]
赞一下 回复此楼
3楼2008-07-13 19:20:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

merlynhuang

金虫 (小有名气)
24cm的胶我没跑过，我认为首先考虑是上样量因素，如果太低的话，可能有些染色方法检测不到，当然如果排除染色液，电泳缓冲液问题，你要注意的是胶条与PAGE胶之间是否有气泡。还有我不赞成大电压跑，发热问题很严重。即便是有斑点，都可能出现横条纹和纵条纹。 好好的装板子，应该不会漏液，再一个注意下电极是否正确。

金币就不用了，可能这些因素没一条对，如果可以，下次把照片发上来。
赞一下 回复此楼
重新泡论坛，才找回做实验的感觉
4楼2008-07-13 22:23:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界
10mA  80V  1W  1小时；390mA  600V  78W 6小时？？？
我的印象中是等电聚焦的时间长呀？等电聚焦一般都是过夜的，还得控制电泳的温度？而第二方向的电泳基本上和普通的PAGE胶电泳没什么大的区别。你没有搞反了两次电泳的设置吧？
不必分享金币，也许不会解决你的问题。
赞一下 回复此楼
位卑未敢忘忧国。
5楼2008-07-14 01:16:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 silentguy 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 05:44 by qL1cU46YIdK0
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:43 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 05:33 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:21 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:15 by Equinoxhua
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 16/800 2026-11-06 04:58 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-06 04:49 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 4/200 2026-11-06 02:37 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:40 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 01:29 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭