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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教关于双向电泳
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silentguy

铜虫 (小有名气)

[交流] 请教关于双向电泳

前几天第一次做双向电泳染色后发现啥也没有，换了一种染色方法还是没有，故排除染色问题。  又怀疑是等电聚焦出错，于是只用marker跑第二向，结果胶上还是很干净没有任何蛋白点。  这样我就觉得是第二向电泳有问题。每次只跑一块胶，原先的设置是10mA  80V  1W  1小时；390mA  600V  78W 6小时。（因为上层缓冲液槽漏液，故将电压电流设得都很大）。  后来发现没有结果，就将设置改为教程上所说的 10mA 80V  1W  1小时；12mA  150V  3W 6小时。 还是什么都没有。真奇怪。感觉步骤很简单啊，怎么会这样呢？  
我用的是Amersham 的电泳系统。哪位高人给点意见吧？谢谢！
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1楼 2008-07-13 17:00:34
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merlynhuang

金虫 (小有名气)
24cm的胶我没跑过，我认为首先考虑是上样量因素，如果太低的话，可能有些染色方法检测不到，当然如果排除染色液，电泳缓冲液问题，你要注意的是胶条与PAGE胶之间是否有气泡。还有我不赞成大电压跑，发热问题很严重。即便是有斑点，都可能出现横条纹和纵条纹。 好好的装板子，应该不会漏液，再一个注意下电极是否正确。

金币就不用了，可能这些因素没一条对，如果可以，下次把照片发上来。
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重新泡论坛，才找回做实验的感觉
4楼2008-07-13 22:23:52
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merlynhuang

金虫 (小有名气)
★
silentguy(金币+1,VIP+0):非常感谢，恳请给点建议，呵呵
第二向，390mA  600V  78W 6小时？？？！！
12mA  150V  3W 6小时？？？！！
你是多大的胶？如果是小胶，估计早就跑出胶外了
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重新泡论坛，才找回做实验的感觉
2楼2008-07-13 17:29:57
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silentguy

铜虫 (小有名气)
24cm的胶，呵呵，因为上层缓冲液槽漏液，所以咨询了一下GE的技术人员，人家说要把电压什么的调到最大，我也不记得电流和功率要不要调，就都调了。

弱问一般如何设置呢？12mA  150V  3W 应该是不大吧，这是over night 的设置了。

[ Last edited by silentguy on 2008-7-13 at 19:22 ]
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3楼2008-07-13 19:20:00
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界
10mA  80V  1W  1小时；390mA  600V  78W 6小时？？？
我的印象中是等电聚焦的时间长呀？等电聚焦一般都是过夜的，还得控制电泳的温度？而第二方向的电泳基本上和普通的PAGE胶电泳没什么大的区别。你没有搞反了两次电泳的设置吧？
不必分享金币，也许不会解决你的问题。
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位卑未敢忘忧国。
5楼2008-07-14 01:16:42
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