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q904954717

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请问有没有知道蛋白酶K能不能使RNA酶和限制性内切酶失活啊？急急急 已有3人参与

我想用限制性内切酶切核酸之后采用蛋白酶K处理DNA，有没有知道蛋白酶K能不能使限制性内切酶失活呢？？还有能不能使RNA酶失活啊？
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1楼 2015-05-08 15:20:29
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
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4楼2015-05-09 09:12:22
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yingheqian

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般很少用蛋白酶K去消化吧，这样的话溶液中的离子浓度、蛋白质偏多，对后期的使用有影响。大多数都是用酚-氯仿抽提。
如果要求不高，直接用高浓度EDTA是酶失活也可
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2楼2015-05-08 17:03:15
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lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以失活核酸酶，加点SDS更保险。不过你的后续应用是什么？要除去蛋白酶和SDS还要靠酚氯仿抽提和乙醇沉淀，还不如直接酚氯仿抽提和乙醇沉淀。
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3楼2015-05-08 23:35:21
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Zhanjiang001

新虫 (初入文坛)
蛋白酶K，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力，因而它应用很广泛，包括制备脉冲电泳的染色体DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μg/ml。在较广的pH范围内（pH 4-12.5）均有活性。
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5楼2015-05-09 16:16:27
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