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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体表达
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惊叹号

金虫 (正式写手)

[求助] 载体表达 已有4人参与

构建载体时，怎么判断目的基因和EGFP表达的是融合蛋白还是独立表达？
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1楼 2015-05-07 10:20:19
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nemo88

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
惊叹号: 金币+5 2015-05-07 17:13:17
本帖内容被屏蔽
2楼2015-05-07 10:27:48
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惊叹号

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by nemo88 at 2015-05-07 10:27:48
跑电泳检测分子量？荧光检测？

我是需要在构建之前判断它的融合的还是独立的，怎么判断？
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3楼2015-05-07 10:45:44
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caihang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
惊叹号: 金币+5 2015-05-07 17:13:25
EGFP一般是在多克隆位点的前面或后面，主要是通过荧光来判断目的基因的表达。肯定是融合蛋白。如果你担心EGFP对试验有影响可以自己设计终止子，不让它表达或者在EGFP和目标蛋白之间设计LINKER。
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4楼2015-05-07 15:32:44
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
惊叹号: 金币+5 2015-05-07 17:13:33
在多克隆位点和EGFP之间，看看载体上是否有另一个启动子，如果有就一定是独立的共表达，如果没有，则可以进行融合表达。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2015-05-07 16:06:03
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
惊叹号: 金币+5 2015-05-07 17:13:40
看是一个ORF还是两个ORF。
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6楼2015-05-07 16:12:31
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惊叹号

金虫 (正式写手)
我选择的载体MCS在EGFP前面，表达的是一个融合蛋白，现在的问题是融合蛋白的话，EGFP会不会影响目的基因的折叠？
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7楼2015-05-07 17:14:42
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wanglele87

金虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-07 23:01:18
没移码的话理论上就是一起表达了啊。不过有时候可能目的蛋白不好表达或者表达后不稳定，western只能看到egfp。

[ 发自小木虫客户端 ]
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一生不羁放纵爱自由
8楼2015-05-07 18:15:46
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