24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
查看: 1002  |  回复: 7

惊叹号

金虫 (正式写手)

[求助] 载体表达已有4人参与

构建载体时,怎么判断目的基因和EGFP表达的是融合蛋白还是独立表达?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nemo88

禁虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
惊叹号: 金币+5 2015-05-07 17:13:17
本帖内容被屏蔽

2楼2015-05-07 10:27:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

惊叹号

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by nemo88 at 2015-05-07 10:27:48
跑电泳检测分子量?荧光检测?

我是需要在构建之前判断它的融合的还是独立的,怎么判断?
3楼2015-05-07 10:45:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caihang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
惊叹号: 金币+5 2015-05-07 17:13:25
EGFP一般是在多克隆位点的前面或后面,主要是通过荧光来判断目的基因的表达。肯定是融合蛋白。如果你担心EGFP对试验有影响可以自己设计终止子,不让它表达或者在EGFP和目标蛋白之间设计LINKER。
4楼2015-05-07 15:32:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
惊叹号: 金币+5 2015-05-07 17:13:33
在多克隆位点和EGFP之间,看看载体上是否有另一个启动子,如果有就一定是独立的共表达,如果没有,则可以进行融合表达。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2015-05-07 16:06:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
惊叹号: 金币+5 2015-05-07 17:13:40
看是一个ORF还是两个ORF。
6楼2015-05-07 16:12:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

惊叹号

金虫 (正式写手)

我选择的载体MCS在EGFP前面,表达的是一个融合蛋白,现在的问题是融合蛋白的话,EGFP会不会影响目的基因的折叠?
7楼2015-05-07 17:14:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanglele87

金虫 (著名写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-07 23:01:18
没移码的话理论上就是一起表达了啊。不过有时候可能目的蛋白不好表达或者表达后不稳定,western只能看到egfp。

[ 发自小木虫客户端 ]
一生不羁放纵爱自由
8楼2015-05-07 18:15:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 惊叹号 的主题更新
信息提示
请填处理意见