| 查看: 1611 | 回复: 7 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
谁呀你是谁呀金虫 (小有名气)
|
[求助]
重金求解双荧光素酶报告系统内参不平已有2人参与
|
|
|
每次实验都这样 疯了 一旦有有效答案 500金币亲手奉上 说下具体的试验设计，这样比较好讨论。 试验目的是要证明启动子对不同激素的应答，将启动子构建在pGL3载体上，转染细胞12h后用激素处理，内参质粒用pRL-TK，2个质粒共转染。48h后离心取上清测定酶活。 转染体系是：1ug； pRL 0.1ug。 设三组平行试验，三组试验测出的值Luciferase/内参值及其不稳定，重复多次都是这样，举个例子，这个还算是差的比较少的一组了。 Luciferase 内参 比值 平行一 Luciferase 15971 16904.3 16269.4 内参 288.004 22 48.0001 平行2 Luciferase 28809.6 31550.8 32212.6 内参 162.001 30 60.0002 大家试验过程中有遇到过相同的问题吗？我的试验步骤已经写的很详细了，哪位高手看着要是发现是什么地方出了问题，劳烦指教一下。 另外又一个疑问：按照双荧光素检测的原理来看，有了pRL质粒作为内参的话，是可以去除试验之间存在的误差，如细胞数目，转染效率之间的差异，按这样的说法，那多次重复试验测的值应该是差不多，并且具有比较性的，可是我重复试验的值完全不具有重复性，内参波动非常的大，连波动的趋势上来看都不具有重复性，这是什么原因？ |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
wjykycg» 猜你喜欢
三颈瓶加热
已经有5人回复
-
请问三个字的中文名字，在文中到底怎么表示？
已经有7人回复
-
高校辞职，要求赔偿，这到底合不合理
已经有36人回复
-
博后面上今天下午会公布吗？大家有无消息？
已经有14人回复
-
为何全世界都用JCR分区，咱们要弄个中科院分区？意义何在？
已经有3人回复
-
我在写关于多维空间的论文，希望能与大家交流，准备在science上发表
已经有11人回复
-
脱酯基合成步骤
已经有8人回复
-
offer选择
已经有9人回复
-
关于论文第一通讯作者的问题？
已经有4人回复
-
大佬们，打的核磁氢谱与chemdraw预测的有偏差
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 【分享】个人整理 Western Blot(转）
已经有73人回复
wjykycg
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 9157.1
- 散金: 20
- 红花: 2
- 沙发: 1
- 帖子: 353
- 在线: 1588.9小时
- 虫号: 3236029
- 注册: 2014-05-26
- 专业: 抗肿瘤药物药理
8楼2015-05-08 23:14:55
wjykycg
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 9157.1
- 散金: 20
- 红花: 2
- 沙发: 1
- 帖子: 353
- 在线: 1588.9小时
- 虫号: 3236029
- 注册: 2014-05-26
- 专业: 抗肿瘤药物药理
2楼2015-05-07 10:37:51
wjykycg
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 9157.1
- 散金: 20
- 红花: 2
- 沙发: 1
- 帖子: 353
- 在线: 1588.9小时
- 虫号: 3236029
- 注册: 2014-05-26
- 专业: 抗肿瘤药物药理
3楼2015-05-07 10:45:03
ankang0910
金虫 (正式写手)
- 应助: 19 (小学生)
- 金币: 835
- 散金: 2008
- 红花: 6
- 帖子: 329
- 在线: 146.1小时
- 虫号: 1062441
- 注册: 2010-07-22
- 性别: GG
- 专业: 医学免疫学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
谁呀你是谁呀: 金币+50, ★有帮助 2015-05-08 09:52:38
感谢参与，应助指数 +1
谁呀你是谁呀: 金币+50, ★有帮助 2015-05-08 09:52:38
|
你选择的是DLR吗？那么II值只有两，三位数就太低了。一般tk绝对值至少4位数以上，基底值都有100左右，你只有二三十我认为不合理啊。可能原因我猜测有这么几点：一是你的转染效率太低了，按说tk0.1ug已经不少了，可值这么低，我想应该是没转进去吧。可以转染荧光质粒看一下效率。二是有可能你的激素或者是转染方法、脂质体什么的对细胞毒性较大，导致细胞活性丧失，数值不稳定。哈哈，供你参考，不求加分，祝你实验顺利。有不对的地方请大神指正，谢谢。 [ 发自小木虫客户端 ] |
4楼2015-05-07 23:24:54
5