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camillo

[交流] 蚌的基因组DNA提取问题!

Sample Text
      虫友们好,本人现在提取一种蚌的总DNA,提取多次,但每次提取好后,跑胶时,拖尾严重,而且都小于一万bp,请问下这是什么原因啊?望高手们能给小弟指教一下!谢谢!
    注:用的苯酚,异戊醇,氯仿抽提法!

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-13 at 13:47 ]
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界

拖尾严重一般认为是所得的DNA有蛋白的污染,蛋白未抽提完全。
分子量大小小于1万bps,主要是酚氯仿抽提造成剪切所致。要想获得大分子量的genomic DNA,可以在蛋白酶K充分消化后,直接用异丙醇沉淀即可,不必经过酚氯仿抽提的步骤。这也得看你抽提DNA以后,用于什么目的了。如果仅仅是做pcr之类的,不必酚氯仿抽提。
位卑未敢忘忧国。
3楼2008-07-16 06:25:27
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辛雨237

铁杆木虫 (著名写手)

写一下你的详细提取过程,才可以发现问题
酚仿法提取贝类没有问题的
春暖花开
2楼2008-07-12 20:41:23
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camillo

谢谢上面两位大侠的帮助。
我的具体提取方法是:
1.取蚌的组织并洗净后,加入缓冲液在65度下消化完全
2.加入等体积的酚,反复摇匀10min,12000rmp离心10min,取上清;
3.加入等体积的酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),反复摇匀10min,,12000rmp离心10min,取上清。
4.加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1),反复摇匀10min,12000rmp离心10min,取上清
5.加入2倍体积冷冻无水乙醇,静置3小时,混匀后12000rmp离心,弃上清
6.加入70%的乙醇,冲洗两遍,12000rmp离心2min,室温干燥
7.加入TE充分溶解,然后1%电泳跑胶检测!
4楼2008-08-27 22:08:22
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