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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蚌的基因组DNA提取问题！
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camillo

[交流] 蚌的基因组DNA提取问题！

Sample Text
      虫友们好，本人现在提取一种蚌的总DNA，提取多次，但每次提取好后，跑胶时，拖尾严重，而且都小于一万bp，请问下这是什么原因啊？望高手们能给小弟指教一下！谢谢！
    注：用的苯酚，异戊醇，氯仿抽提法！

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-13 at 13:47 ]
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1楼 2008-07-11 15:11:43
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界
拖尾严重一般认为是所得的DNA有蛋白的污染，蛋白未抽提完全。
分子量大小小于1万bps，主要是酚氯仿抽提造成剪切所致。要想获得大分子量的genomic DNA，可以在蛋白酶K充分消化后，直接用异丙醇沉淀即可，不必经过酚氯仿抽提的步骤。这也得看你抽提DNA以后，用于什么目的了。如果仅仅是做pcr之类的，不必酚氯仿抽提。
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位卑未敢忘忧国。
3楼2008-07-16 06:25:27
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辛雨237

铁杆木虫 (著名写手)
写一下你的详细提取过程，才可以发现问题
酚仿法提取贝类没有问题的
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春暖花开
2楼2008-07-12 20:41:23
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camillo

谢谢上面两位大侠的帮助。
我的具体提取方法是:
1.取蚌的组织并洗净后，加入缓冲液在65度下消化完全
2.加入等体积的酚，反复摇匀10min，12000rmp离心10min，取上清；
3.加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），反复摇匀10min，，12000rmp离心10min，取上清。
4.加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1），反复摇匀10min，12000rmp离心10min，取上清
5.加入2倍体积冷冻无水乙醇，静置3小时，混匀后12000rmp离心，弃上清
6.加入70%的乙醇，冲洗两遍，12000rmp离心2min，室温干燥
7.加入TE充分溶解，然后1%电泳跑胶检测！
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4楼2008-08-27 22:08:22
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