24小时热门版块排行榜    

查看: 950  |  回复: 3
当前主题已经存档。

camillo

[交流] 蚌的基因组DNA提取问题!

Sample Text
      虫友们好,本人现在提取一种蚌的总DNA,提取多次,但每次提取好后,跑胶时,拖尾严重,而且都小于一万bp,请问下这是什么原因啊?望高手们能给小弟指教一下!谢谢!
    注:用的苯酚,异戊醇,氯仿抽提法!

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-13 at 13:47 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

辛雨237

铁杆木虫 (著名写手)

写一下你的详细提取过程,才可以发现问题
酚仿法提取贝类没有问题的
春暖花开
2楼2008-07-12 20:41:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界

拖尾严重一般认为是所得的DNA有蛋白的污染,蛋白未抽提完全。
分子量大小小于1万bps,主要是酚氯仿抽提造成剪切所致。要想获得大分子量的genomic DNA,可以在蛋白酶K充分消化后,直接用异丙醇沉淀即可,不必经过酚氯仿抽提的步骤。这也得看你抽提DNA以后,用于什么目的了。如果仅仅是做pcr之类的,不必酚氯仿抽提。
位卑未敢忘忧国。
3楼2008-07-16 06:25:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

camillo

谢谢上面两位大侠的帮助。
我的具体提取方法是:
1.取蚌的组织并洗净后,加入缓冲液在65度下消化完全
2.加入等体积的酚,反复摇匀10min,12000rmp离心10min,取上清;
3.加入等体积的酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),反复摇匀10min,,12000rmp离心10min,取上清。
4.加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1),反复摇匀10min,12000rmp离心10min,取上清
5.加入2倍体积冷冻无水乙醇,静置3小时,混匀后12000rmp离心,弃上清
6.加入70%的乙醇,冲洗两遍,12000rmp离心2min,室温干燥
7.加入TE充分溶解,然后1%电泳跑胶检测!
4楼2008-08-27 22:08:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 camillo 的主题更新
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 3/150 2026-11-10 01:40 by FChKX8meu1ds
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 4/200 2026-11-10 01:29 by FChKX8meu1ds
[考博] 27博士申请 +3 白白白ly 2026-11-09 3/150 2026-11-09 21:39 by szq0819
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 5/250 2026-11-09 16:53 by 张丹枫1991
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-09 13:26 by Equinoxhua
[考研] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 15/750 2026-11-09 13:19 by Equinoxhua
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 16/800 2026-11-09 11:47 by GwrQVVR6Oenx
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 10/500 2026-11-09 08:00 by IhnEQauGmT3K
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-08 23:01 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
信息提示
请填处理意见