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转染TLR4检测双荧光素酶，细胞背景太高是和解？？
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细胞293FT 质粒： TLR4100ng MD-2 100ng pBX-II luc NF-κB 50ng pRL-TK 0.5ng Invitrogen Lipo2000脂质体 转这4个质粒，转染6小时换液，然后等24小时用promega试剂盒裂解检测， 1.只转染两个荧光质粒的孔，背景比值0.5 2.转染TLR4+MD-2+两个荧光质粒，居然比值有44倍 3.转染TLR4+MD-2+两个荧光质粒，5ng/ml LPS刺激，居然还是44倍 说明转染TLR4/MD-2自己就已经在活化了？但是同批做的转染TLR2就没有问题，只有TLR4是这样子，这是什么问题？有没有战友碰到过？ 不同批次培养基，不同批次血清，不同批次提的去内毒素质粒，都试了，还是这样子？ 是去内毒素提质粒时去的不好，有残留吗？但是我6小时已经全换液了 还是有支原体污染细胞了？我们到是没有做过除支原体操作，但是貌似支原体不活化TLR4，只活化TLR2 |
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2楼2015-05-02 02:36:21