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蓝色的心情79

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR 已有2人参与

最近做PCR，P尖镰孢菌的第二轮用来做DGGE，几天前同样的条件下P出来的效果还挺好，最近一阶段P出来的效果不好了，主条带几乎看不清，但是杂带特别亮。其中排除了引物的原因，因为以前也是用的同样的引物，1轮产物没问题，MIX也没问题，退火温度也降了，但是都不好使，求大神帮忙
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1楼 2015-04-30 09:48:04
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蓝色的心情79

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangranjun at 2015-05-04 18:14:06
模板有没有问题呢？

一共P2轮，第1轮产物没有问题，稀释10倍后P第二轮，以前P的还挺好，现在P的看不见主条带，杂带导师挺亮
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3楼2015-05-05 11:43:43
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

模板有没有问题呢？
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
2楼2015-05-04 18:14:06
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
蓝色的心情79: 金币+30, ★★★很有帮助 2015-05-10 15:55:25
引用回帖:
3楼: Originally posted by 蓝色的心情79 at 2015-05-05 11:43:43
一共P2轮，第1轮产物没有问题，稀释10倍后P第二轮，以前P的还挺好，现在P的看不见主条带，杂带导师挺亮...

二次PCR扩增要比一次复杂，对一次产物要鉴定再进行二次P，还有就是模板要稀释1000倍，注意二次PCR模板的纯度，且产物再次PCR极易产生错配，所以酶的特异性要高 最好选用热启动酶，或热启动型的高保真酶系列，能够最大避免非特异性产物产生
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-05-06 10:44:02
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