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花开ヽ终是落

银虫 (小有名气)

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[求助] WB相关实验，分子量12KD怎么作出漂亮的带，第一次做。求助已有3人参与

导师要求做WB但是分子量着实太小，实验室都木有做过。求助分子量12KD，分离胶及浓缩胶浓度，电泳时间及转膜时间，感谢大神赐教

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1楼 2015-04-27 09:59:40

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花开ヽ终是落

银虫 (小有名气)

引用回帖:

4楼: Originally posted by nemo88 at 2015-04-27 16:22:44
12~15%胶时间根据溴酚蓝或者Transgene有12k的预染marker 电压一般不是很讲究我一般用100V15min转150V 跑个1个多小时。。。
0.22umPVDF膜恒压 100V 45min

3Q

[ 发自小木虫客户端 ]

5楼2015-04-28 08:23:18

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WHABnew

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-04-28 09:21:00

当时实验室也有一个是15kd的，跟我用的同样浓度的胶，12%，电泳你可以看buffer，还有根据你的marker条带，太小的蛋白不注意的确容易跑出去，至于转膜可以用PVDF，但是得是22mm孔径的，45的太大，时间根据你门实验室仪器平时多少时间你就多少时间，先摸索下，然后做个考染基本就可以确定范围了