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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » WB相关实验，分子量12KD怎么作出漂亮的带，第一次做。求助
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花开ヽ终是落

银虫 (小有名气)

[求助] WB相关实验，分子量12KD怎么作出漂亮的带，第一次做。求助 已有3人参与

导师要求做WB但是分子量着实太小，实验室都木有做过。求助分子量12KD，分离胶及浓缩胶浓度，电泳时间及转膜时间，感谢大神赐教
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1楼 2015-04-27 09:59:40
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WHABnew

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-04-28 09:21:00
当时实验室也有一个是15kd的，跟我用的同样浓度的胶，12%，电泳你可以看buffer，还有根据你的marker条带，太小的蛋白不注意的确容易跑出去，至于转膜可以用PVDF，但是得是22mm孔径的，45的太大，时间根据你门实验室仪器平时多少时间你就多少时间，先摸索下，然后做个考染基本就可以确定范围了
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花开ヽ终是落
2楼2015-04-27 14:48:09
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swlsangon

木虫 (小有名气)

快乐的木虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
上层胶10%，下层胶12%
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生命在于运动
3楼2015-04-27 15:44:48
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nemo88

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
花开ヽ终是落: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2015-04-28 08:24:12
本帖内容被屏蔽
4楼2015-04-27 16:22:44
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花开ヽ终是落

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by nemo88 at 2015-04-27 16:22:44
12~15%胶  时间根据溴酚蓝或者Transgene有12k的预染marker    电压一般不是很讲究   我一般用100V15min转150V 跑个1个多小时。。。
0.22umPVDF膜 恒压 100V 45min

3Q

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2015-04-28 08:23:18
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花开ヽ终是落

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by WHABnew at 2015-04-27 14:48:09
当时实验室也有一个是15kd的，跟我用的同样浓度的胶，12%，电泳你可以看buffer，还有根据你的marker条带，太小的蛋白不注意的确容易跑出去，至于转膜可以用PVDF，但是得是22mm孔径的，45的太大，时间根据你门实验室 ...

谢谢

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6楼2015-04-28 08:23:50
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