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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如何构建PCR反应体系、PCR反应条件
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天宇201266

金虫 (正式写手)

[求助] 如何构建PCR反应体系、PCR反应条件 已有5人参与

本人刚接触PCR，不知道PCR反应体系以及PCR反应条件如何设定，以及所依据的原理，求指导，谢谢，比如50ul的反应体系，模板、引物、缓冲液、镁离子、水的量是依据什么来选定的，求高手指导，谢谢
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在路上。。。
1楼 2015-04-24 19:41:13
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
天宇201266: 金币+3, ★有帮助 2015-04-28 08:59:39
模板加入量：质粒 100pg-10ng
Lambda DNA ：100pg-100ng，基因组：10-200ng，大肠杆菌：100pg-100ng
引物的设计对新手来说，可能比较困难，其他dNTP，镁离子水等参照说明书，你使用的Taq聚合酶的说明书，你买到的可能是预混液也可能是单个的，总之说明书上有反应体系构建指导
如何构建PCR反应体系、PCR反应条件
Relia™热启动Taq酶
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
11楼2015-04-27 14:13:55
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查看全部 12 个回答

草溪河

铁虫 (著名写手)
这个嘛，其实在网上一搜一大把，还可买PCR MIX，照说明书就行
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2楼2015-04-24 23:39:47
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酒家何处

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-25 23:28:17
天宇201266: 金币+1, ★有帮助 2015-04-27 13:34:58
一般需要模板引物就行了。现在dntp，taq，mg2+都是预混型的。市场简称mix。50ul，正常1ul模板，引物各1ul，水22，mix25

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2015-04-25 10:57:01
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neckey

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你做PCR的目的是什么？如果有相关的试剂盒的话可以参考该试剂盒的说明书，一般说明书里有建议的反应体系，也可以问问实验室的其他小伙伴，也许他们知道。希望能帮到你，我也只是一个学徒
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4楼2015-04-25 11:30:01
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查看全部 12 个回答
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