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天宇201266

金虫 (正式写手)

[求助] 如何构建PCR反应体系、PCR反应条件 已有5人参与

本人刚接触PCR,不知道PCR反应体系以及PCR反应条件如何设定,以及所依据的原理,求指导,谢谢,比如50ul的反应体系,模板、引物、缓冲液、镁离子、水的量是依据什么来选定的,求高手指导,谢谢
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在路上。。。
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
天宇201266: 金币+3, 有帮助 2015-04-28 08:59:39
模板加入量:质粒 100pg-10ng
Lambda DNA :100pg-100ng,基因组:10-200ng,大肠杆菌:100pg-100ng
引物的设计对新手来说,可能比较困难,其他dNTP,镁离子水等参照说明书,你使用的Taq聚合酶的说明书,你买到的可能是预混液也可能是单个的,总之说明书上有反应体系构建指导
如何构建PCR反应体系、PCR反应条件
Relia™热启动Taq酶

todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
11楼2015-04-27 14:13:55
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草溪河

铁虫 (著名写手)

这个嘛,其实在网上一搜一大把,还可买PCR MIX,照说明书就行
2楼2015-04-24 23:39:47
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酒家何处

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-25 23:28:17
天宇201266: 金币+1, 有帮助 2015-04-27 13:34:58
一般需要模板引物就行了。现在dntp,taq,mg2+都是预混型的。市场简称mix。50ul,正常1ul模板,引物各1ul,水22,mix25

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-04-25 10:57:01
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neckey

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你做PCR的目的是什么?如果有相关的试剂盒的话可以参考该试剂盒的说明书,一般说明书里有建议的反应体系,也可以问问实验室的其他小伙伴,也许他们知道。希望能帮到你,我也只是一个学徒
4楼2015-04-25 11:30:01
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