| 查看: 643 | 回复: 3 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
weleozhu银虫 (小有名气)
|
[求助]
使用Sau3AI建立水稻shotgun库，但连接多次不长，求经验大神帮助 已有1人参与
|
|
| 我最近在构建一个水稻的shotgun亚克隆文库，质粒来源是水稻的BAC文库的一个BAC质粒，使用的是PUC19作为载体，回收的片段为7-10K，酶切质粒条件摸索得差不多了，在目的区域也有比较集中的片段，然后切胶回收后，连接到用BamHI酶切然后用NEB CIP脱磷的PUC19上，问题就出在这，连接转化后就是不见一个菌斑。 我转化的菌株是XL1-Blue，用的是电转化， 感受态效率已经经过验证，没有问题，符合建库要求。最近被这个快烦死了，都快两个月了，求求大神棒棒忙，或者改一下方案也行。问题解决了加送金币。 |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有247人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
weleozhu
银虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 457.2
- 帖子: 92
- 在线: 35.3小时
- 虫号: 1978180
- 注册: 2012-09-05
- 专业: 作物种质资源与遗传育种学
4楼2016-02-25 17:29:49
2楼2016-01-18 17:23:56
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
weleozhu: 金币+50, ★★★★★最佳答案, 后面的童鞋可以试试 2016-02-25 17:30:36
weleozhu: 金币+50, ★★★★★最佳答案, 后面的童鞋可以试试 2016-02-25 17:30:36
| 今天又看到了该帖，再次说一下我的观点。我建议你换一管新的BamHI 没切载体试一下，然后做一个NEB CIP脱磷前PUC19载体的自连实验，转化后看载体的自连率有多高。上述实验失败，有可能是载体完全没有切开，片段没法连接进去，用CIP脱磷处理后，也不存在载体自连接的情况，故转化后一个菌落都没有。以前我们实验室也碰到过这样的情况。载体酶切时适当的延长酶切的时间，连接时置入4℃冰箱，延长连接的时间。 |
3楼2016-02-25 08:43:25
5