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jwets

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[交流] 高效液相测定丙戊酸钠血药浓度相关问题探讨？问题如图

方法：血液样品经3500r/min离心5min，取血清100μL于离心管中，加内标液（环己烷羧酸）50μl、硫酸（1mol/L）50μl，混匀1min，加正己烷600μl振荡混匀2min，然后以5000r/min离心5min，取上清液有机相于干净的离心管中，下层液再加500μl正己烷振荡混匀2min，再次以5000r/min离心5min，合并两次上清有机相，加2-溴代苯乙酮（40mg/mL）和三乙胺各10μl，振荡混匀2min，于55℃水浴15min，然后氮气吹干，用流动相100μl溶解残渣，振荡混匀2min，再以10000r/min离心5min，取上清10μl进样。（以上各试剂配制好后置于冰箱冷藏）
色谱条件：色谱柱：C18柱（150mm*4.6mm，5μm）；流动相：甲醇：水=71:29；检测波长：248nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样量：10μl；
问题：如图1可见在22min左右有一个很宽大的峰，极性应该小，不知道是什么？虽然不会影响主峰的出来，但会严重影响我的实验时间和浪费试剂！同时我换了（250mm*4.6mm，5μm）的色谱柱（流动相：甲醇：水=75:25；检测波长：248nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样量：10μl），前期效果还可以（如图2），这个杂质峰会在5min之前出来，不影响主峰，但过一段时间一个月以后这个宽峰会飘到了7-8min出来（如图3），这就会影响我的主峰！问问大家这个杂质峰是什么东西，在前处理中能不能出去掉，反正更改色谱条件我基本上能改的都改了，都试过了，没有什么效果。大家能不能帮我改进改进...

图一.jpg

图二.jpg

图三.jpg

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DOPAMINE兴奋你的人生！

1楼 2015-04-23 17:12:37

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zhangxuan200

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jwets: 金币+5, 有帮助！ 2015-04-24 17:37:51

我觉得应该是血浆中的脂肪酸类的成分吧，也可以酸化并被正己烷提取出来。
因为极性较小，所以在液相上出峰时间较晚。在25-30min，另外，你说的杂质在图2中是在5min出峰，会不会是上一针残留的呢？图3也一样，也可能是上一针残留的，因为这个色谱峰那么宽，不可能是出峰很早的，只能是上几个样品残留下来的。
换一下样品处理方法，如比正己烷极性大一点的提取溶剂，看能否去除此类成分。或者每针的检测时间延长，等这个杂质出来了再进下一个样品。

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2楼2015-04-24 14:20:35

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jwets

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引用回帖:

2楼: Originally posted by zhangxuan200 at 2015-04-24 14:20:35
我觉得应该是血浆中的脂肪酸类的成分吧，也可以酸化并被正己烷提取出来。
因为极性较小，所以在液相上出峰时间较晚。在25-30min，另外，你说的杂质在图2中是在5min出峰，会不会是上一针残留的呢？图3也一样，也可能 ...

残留问题我也考虑过，残留我觉得不可能，应为图二，图三的条件我做过一针跑过60min的，这个很宽的峰一直是每一针都有，在主峰出完以后就没有其他峰了。色谱条件这一块我基本都摸完了，前处理这一块因为是拿别人的方法，提取这一块也是别人的方法，如你说可以换换萃取剂试试。

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DOPAMINE兴奋你的人生！

3楼2015-04-24 17:37:47

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