应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于测序的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
71/1返回列表
查看: 565  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

habuking

[交流] 关于测序的问题

我用了M13引物做菌落PCR鉴定阳性克隆，电泳以后发现两条带，一条在1000bp左右，那应该是我的目的条带，但在200bp左右还有另外一条较弱的带，我初步估计应该是载体自连后，M13扩增出来的多克隆位点的序列，查找了载体图，在M13之间的多克隆位点差不多真的有200bp左右,由此可推断，我的单克隆菌里有两种载体，一种是PESSY-T3-目的蛋白，另一种是自连的空载，请问这样对我的测序结果有影响么？

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-16 at 20:56 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-07-08 14:43:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxwjimmy

木虫 (正式写手)
你得到的阳性克隆都是这样吗？
如果真的如你推断的，肯定会影响测序结果的
赞一下 回复此楼
2楼2008-07-08 20:50:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

habuking

因为做的蓝白斑点筛选，就挑了两个白斑，开始用PCR引物做菌落PCR鉴定的，结果显示有一个是目的条带大小，就将那个平板扔了，以往都是用PCR引物做鉴定的。后来又借用别人的M13引物鉴定了一次，才发现出问题了，并且测序结果出来，说我有重叠峰。
载体自连的问题，应该是避免不了的，要不然，蓝白斑筛选就失去意义了，可是怎样才能避免自连载体跟连有目的蛋白的载体，同时进入感受态细胞呢？
赞一下 回复此楼
3楼2008-07-09 13:21:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meizihan

新虫 (初入文坛)
转化进入感受态,涂平板挑单克隆,PCR检验就行了.
赞一下 回复此楼
4楼2008-07-09 21:29:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxwjimmy

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by habuking at 2008-7-9 13:21:
因为做的蓝白斑点筛选，就挑了两个白斑，开始用PCR引物做菌落PCR鉴定的，结果显示有一个是目的条带大小，就将那个平板扔了，以往都是用PCR引物做鉴定的。后来又借用别人的M13引物鉴定了一次，才发现出问题了，并且 ...

我觉得两种质粒同时进入受体菌的机率应该是很小的
赞一下 回复此楼
5楼2008-07-10 10:43:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
根据质粒不相容性原理，同种来源的质粒不可能同时存在于同一个大肠杆菌细胞中，所以如果你是跳取得单菌落的话，不可能载体自连和重组质粒都有的
赞一下 回复此楼
6楼2008-07-10 11:40:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 habuking 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 张芳铭-中国农业大学-环境工程专硕-298 +3 手机用户 2026-03-26 3/150 2026-03-27 21:39 by lbsjt
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-03-27 7/350 2026-03-27 20:59 by AZMK
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +3 小张zxy张 2026-03-26 5/250 2026-03-27 18:42 by 小张zxy张
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-25 7/350 2026-03-27 14:47 by 狂炫麦当当
[考研] 材料求调剂 +5 .m.. 2026-03-25 5/250 2026-03-27 11:08 by 不吃魚的貓
[考研] 材料学硕，求调剂 6+5 糖葫芦888ll 2026-03-22 10/500 2026-03-27 08:18 by hypershenger
[考研] 343求调剂 +4 赠我一本书 2026-03-23 4/200 2026-03-27 00:40 by wxiongid
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +5 星沉uu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:02 by macy2011
[考研] 279求调剂 +6 红衣隐官 2026-03-21 6/300 2026-03-26 18:32 by 不吃魚的貓
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +4 钢铁大炮 2026-03-24 4/200 2026-03-26 16:28 by dick_runner
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂 +9 稻妻小编 2026-03-26 9/450 2026-03-26 16:16 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂 +6 jiajunX 2026-03-22 6/300 2026-03-25 23:05 by licg0208
[考研] 318求调剂 +5 plum李子 2026-03-21 8/400 2026-03-25 09:26 by aa331100
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 300求调剂，材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[考研] 277分求调剂，跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 305分求调剂（食品工程） +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭