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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒提取
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瓜尔佳氏鱼鱼

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取 已有2人参与

我现在遇到了一个情况，就是质粒提取出来之后条带亮度没有参考文献中的亮，怎么才能提高亮度？我增加了菌液了量，增加了跑胶的点样量，都不行。
此外我开始制胶的时候，就直接将EB加进去了，我老师说应该跑完胶之后染色，但是效果是一样的，不亮，应该怎么解决？我是用天根的提质粒的试剂盒提的。
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过上等人的生活,尽中等人的劳力,享下等人的情欲。
1楼 2015-04-20 17:08:17
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jacobbai

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 瓜尔佳氏鱼鱼 at 2015-04-20 18:21:56
没有注意buffer的量，就是在手套上点了一滴，然后5ul一混的；
那么我的EB染色是应该制胶的时候就加入，还是跑完胶染色呢？...

loading buffer跟质粒是5:1（质粒浓度大概100ng/ul上下），EB是制胶时候加的，待胶不是很烫手的时候加入即可。
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4楼2015-04-20 18:45:06
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云中子2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 瓜尔佳氏鱼鱼 at 2015-04-20 18:21:56
没有注意buffer的量，就是在手套上点了一滴，然后5ul一混的；
那么我的EB染色是应该制胶的时候就加入，还是跑完胶染色呢？...

可以配成EB染液，等跑完胶之后泡三分钟，用自来水冲洗，然后照胶非常亮。
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科研路上无坦途
14楼2015-04-22 19:52:07
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jacobbai

新虫 (初入文坛)

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★ ★ ★
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瓜尔佳氏鱼鱼: 金币+2, ★有帮助 2015-04-20 18:22:08
瓜尔佳氏鱼鱼: 金币+1, ★有帮助 2015-04-20 19:04:02
loading buffer的量是多少，可以提高loading buffer的量
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2楼2015-04-20 18:06:07
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瓜尔佳氏鱼鱼

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jacobbai at 2015-04-20 18:06:07
loading buffer的量是多少，可以提高loading buffer的量

没有注意buffer的量，就是在手套上点了一滴，然后5ul一混的；
那么我的EB染色是应该制胶的时候就加入，还是跑完胶染色呢？
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过上等人的生活,尽中等人的劳力,享下等人的情欲。
3楼2015-04-20 18:21:56
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瓜尔佳氏鱼鱼

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jacobbai at 2015-04-20 18:45:06
loading buffer跟质粒是5:1（质粒浓度大概100ng/ul上下），EB是制胶时候加的，待胶不是很烫手的时候加入即可。...

好的，我试试，6乘的loading buffer：质粒=5:1，和平时PCR的比例是反着的，对吧？
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过上等人的生活,尽中等人的劳力,享下等人的情欲。
5楼2015-04-20 19:03:30
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
浓度的问题。可以加大菌液培养体积。
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。
6楼2015-04-20 19:11:18
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
7楼2015-04-20 19:45:35
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
瓜尔佳氏鱼鱼: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-04-21 12:52:13
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8楼2015-04-20 19:52:54
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
9楼2015-04-20 19:54:33
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jacobbai

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 瓜尔佳氏鱼鱼 at 2015-04-20 19:03:30
好的，我试试，6乘的loading buffer：质粒=5:1，和平时PCR的比例是反着的，对吧？...

哎呀说错了，我写反了，是1:5。
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10楼2015-04-20 22:16:44
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