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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒提取
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feng37ye

新虫 (初入文坛)
个人觉得制胶的时候加EB比较方便，跑完就能看结果，没有太大影响。条带不亮说明浓度低，少加点TE溶质粒就可以了。还是觉得量不够的话，多培养点（100ml）提一次就有好多了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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11楼2015-04-21 16:39:53
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haze12344

银虫 (小有名气)
我觉得问题不大啊，看你要做什么。如果实在觉得不浓就把菌液摇浓一点就可以了，或者一次多提几个。
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生物你好
12楼2015-04-22 08:04:07
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shenma521

铁虫 (小有名气)
看看你们的讨论，有点搞笑吧。
质粒电泳 条带不亮 最根本的原因是什么？
我告诉你，是因为你提取的质粒质量比较差！从质粒电泳图上判断质量好与坏取决于质粒超螺旋的那条带（看教科书吧）！
跟EB先加或后染色关系不重要，只要确定EB发挥作用并且同时上样的marker条带正常，就可以！
跟loding buffer加多加少也没多大关系，要理解该buffer的作用！加多了充其量把你的样品稀释了，只要你全点上，根本没问题！
你想想marker的那几十ng的条带就可以那么亮！
解决方法…
重新提取质粒，有钱简单的方法，用QIAGEN提一次，取200ng电泳你在看看是不是亮爆了！
没钱麻烦点的方法，把你的质粒用酚氯仿抽提然后再乙醇+NaAC纯化，然后溶解，取200ng电泳看看

[ 发自小木虫客户端 ]
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13楼2015-04-22 08:30:41
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云中子2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 瓜尔佳氏鱼鱼 at 2015-04-20 18:21:56
没有注意buffer的量，就是在手套上点了一滴，然后5ul一混的；
那么我的EB染色是应该制胶的时候就加入，还是跑完胶染色呢？...

可以配成EB染液，等跑完胶之后泡三分钟，用自来水冲洗，然后照胶非常亮。
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科研路上无坦途
14楼2015-04-22 19:52:07
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瓜尔佳氏鱼鱼

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 云中子2014 at 2015-04-22 19:52:07
可以配成EB染液，等跑完胶之后泡三分钟，用自来水冲洗，然后照胶非常亮。...

我试试，谢谢。
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过上等人的生活,尽中等人的劳力,享下等人的情欲。
15楼2015-04-23 14:29:27
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瓜尔佳氏鱼鱼

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by shenma521 at 2015-04-22 08:30:41
看看你们的讨论，有点搞笑吧。
质粒电泳 条带不亮 最根本的原因是什么？
我告诉你，是因为你提取的质粒质量比较差！从质粒电泳图上判断质量好与坏取决于质粒超螺旋的那条带（看教科书吧）！
跟EB先加或后染色关系 ...

谢谢
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过上等人的生活,尽中等人的劳力,享下等人的情欲。
16楼2015-04-23 14:29:36
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瓜尔佳氏鱼鱼

银虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by haze12344 at 2015-04-22 08:04:07
我觉得问题不大啊，看你要做什么。如果实在觉得不浓就把菌液摇浓一点就可以了，或者一次多提几个。

谢谢
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过上等人的生活,尽中等人的劳力,享下等人的情欲。
17楼2015-04-23 14:30:00
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yangjingjing

木虫 (正式写手)
60度以下加EB，而且loading和样品比例搞错没啊，菌液培养多久啊？
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努力打败一切
18楼2015-04-23 16:13:08
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