应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 最近在做crispr，请问大家能否告知sgRNA怎么合成还是转录得到
汕头大学海洋科学接受调剂
51/1返回列表
查看: 4051  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

我是丫丫

木虫 (正式写手)

[求助] 最近在做crispr，请问大家能否告知sgRNA怎么合成还是转录得到 已有4人参与

请问大家能否告知sgRNA怎么合成还是转录得到，另外在原核生物中能做吗？特异性序列多长？还有CRISPR-Cas9表达载体是买的还是自己构建的？刚接触这个课题，不懂，求大神讲解
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
一颗自由的心不知是被身体束缚还是梦想
1楼 2015-04-14 09:56:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我是丫丫

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by pypsak at 2015-04-23 08:56:48
有两种方法：1，体外转录sgRNA+ tracrRNA，然后跟cas9蛋白同转化细菌；2，是构建适合你得菌的敲除质粒，主要是启动子这块需要考虑，但是质粒进去了你得考虑到质粒会一直存在细菌中。...

traceRNA的这个序列怎么得到？sgRNA的20bp可以根据目标序列得到，那traceRNA呢，求解答
赞一下 回复此楼
一颗自由的心不知是被身体束缚还是梦想
9楼2015-04-24 09:58:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

maiduo

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你cre loxp不做了？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2015-04-14 14:06:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我是丫丫

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by maiduo at 2015-04-14 14:06:30
你cre loxp不做了？

？？
回复此楼
一颗自由的心不知是被身体束缚还是梦想
3楼2015-04-14 18:48:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenma521

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
我是丫丫(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-29 18:41:51
sgRNA 是可以在合成引物的公司合成单链带上酶切位点，通过随机退火制备成带酶切位点的小片段再连接到载体上，然后再买一个相关的cas9质粒就可以了。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2015-04-14 21:46:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工349分求调剂 +14 李木子啊哈哈 2026-04-12 15/750 2026-04-14 00:14 by Equinoxhua
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +34 xaw. 2026-04-11 35/1750 2026-04-13 22:22 by zhq0425
[考研] 复试调剂 +17 积极向上； 2026-04-10 19/950 2026-04-13 19:53 by 闲人终南山
[考研] 一志愿双非085400电子信息344 求调剂，对材料和化学方向也感兴趣 +12 无情的小羊 2026-04-09 13/650 2026-04-13 14:17 by 张zhihao
[考研] 368化学求调剂 +14 wwwwabcde 2026-04-07 15/750 2026-04-13 08:36 by lhj2009
[考研] 求调剂288 +7 ioodiiij 2026-04-10 9/450 2026-04-13 08:33 by Hayaay
[考研] 277 数一104，学硕，求调剂 +21 瓶子PZ 2026-04-09 23/1150 2026-04-11 23:12 by labixiaoqiao
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
[考研] 085410 273分调剂 +4 X1999 2026-04-09 4/200 2026-04-11 13:05 by pies112
[考研] 283求调剂，工科！ +12 苏打水7777 2026-04-08 12/600 2026-04-11 10:28 by 逆水乘风
[考研] 工科273调剂 +6 X1999 2026-04-09 7/350 2026-04-11 10:23 by zhq0425
[考研] 0854调剂 +8 950824he@ 2026-04-09 8/400 2026-04-11 10:11 by zhq0425
[考研] 346，工科求调剂 +3 moser233 2026-04-09 3/150 2026-04-11 10:04 by zhq0425
[考研] 298求调剂 +9 钉叮咚冬瓜 2026-04-07 11/550 2026-04-11 09:35 by zhq0425
[考研] 337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 08:57 by zhq0425
[考研] 342电子信息专硕求调剂 +9 你让我怎么荔枝 2026-04-10 10/500 2026-04-11 08:33 by zhq0425
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +6 白云123456789 2026-04-09 8/400 2026-04-10 21:13 by zhouxiaoyu
[考研] 309求调剂 +14 wdhw 2026-04-10 15/750 2026-04-10 21:06 by zhouxiaoyu
[考研] 334求调剂 +16 Riot2025 2026-04-08 17/850 2026-04-09 09:28 by wdyheheeh
[考研] 313求调剂 +3 十六拾陆 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:20 by lbsjt
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭