应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 最近在做crispr，请问大家能否告知sgRNA怎么合成还是转录得到
52/1返回列表
查看: 4064  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

我是丫丫

木虫 (正式写手)

[求助] 最近在做crispr，请问大家能否告知sgRNA怎么合成还是转录得到 已有4人参与

请问大家能否告知sgRNA怎么合成还是转录得到，另外在原核生物中能做吗？特异性序列多长？还有CRISPR-Cas9表达载体是买的还是自己构建的？刚接触这个课题，不懂，求大神讲解
回复此楼

» 猜你喜欢
一颗自由的心不知是被身体束缚还是梦想
1楼 2015-04-14 09:56:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦幻Q仔

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by pypsak at 2015-04-23 08:56:48
有两种方法：1，体外转录sgRNA+ tracrRNA，然后跟cas9蛋白同转化细菌；2，是构建适合你得菌的敲除质粒，主要是启动子这块需要考虑，但是质粒进去了你得考虑到质粒会一直存在细菌中。...

sgRNA ??不是crRNA 吗？？，guide RNA（有20个左右碱基与目的基因相同），我也是看到的
赞一下 回复此楼
Try every moment!!
13楼2016-03-23 11:22:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

maiduo

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你cre loxp不做了？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2015-04-14 14:06:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我是丫丫

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by maiduo at 2015-04-14 14:06:30
你cre loxp不做了？

？？
回复此楼
一颗自由的心不知是被身体束缚还是梦想
3楼2015-04-14 18:48:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenma521

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
我是丫丫(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-29 18:41:51
sgRNA 是可以在合成引物的公司合成单链带上酶切位点，通过随机退火制备成带酶切位点的小片段再连接到载体上，然后再买一个相关的cas9质粒就可以了。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2015-04-14 21:46:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +5 苦命人。。。 2026-04-18 6/300 2026-04-19 12:04 by 手机用户
[考研] 294求调剂 +15 淡然654321 2026-04-15 15/750 2026-04-19 08:20 by cuisz
[考研] 291求调剂 +10 关忆北. 2026-04-14 10/500 2026-04-18 23:32 by 路病情
[考研] 22408 312求调剂 +24 门路摸摸 2026-04-14 26/1300 2026-04-18 13:04 by wunaiy88
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考研] 求调剂 +9 小聂爱学习 2026-04-16 11/550 2026-04-17 22:34 by chixmc
[考研] 一志愿华中农业071010，320求调剂 +17 困困困困坤坤 2026-04-14 19/950 2026-04-17 20:08 by 关一盏灯cd
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
[考博] 申博自荐 +3 Linxia林夏 2026-04-13 3/150 2026-04-16 12:55 by 墨荷之露
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +4 白云123456789 2026-04-13 4/200 2026-04-16 00:18 by 粉沁若尘
[考研] 通信工程求调剂！！！ +6 zlb770521 2026-04-14 6/300 2026-04-15 20:00 by 学员JpLReM
[考研] 085801电气专硕272求调剂 +19 电气李 2026-04-13 21/1050 2026-04-15 13:37 by 黑科技矿业
[考研] 297工科调剂? +14 河南农业大学-能 2026-04-13 15/750 2026-04-15 13:25 by 黑科技矿业
[考研] 105500药学求调剂 +4 x_skys 2026-04-12 4/200 2026-04-14 13:37 by rndfc
[考研] 085600材料与化工349分求调剂 +16 李木子啊哈哈 2026-04-12 17/850 2026-04-14 09:11 by fenglj492
[考研] 考研求调剂 +12 子木呐 2026-04-12 13/650 2026-04-14 01:19 by 王珺璞
[考研] B区0809 ，数一英一，290 求调剂 +3 泠潍1111 2026-04-12 4/200 2026-04-13 20:35 by 学员JpLReM
[考研] 302求调剂 +10 易！? 2026-04-13 10/500 2026-04-13 19:04 by lbsjt
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭