24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 4064  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

我是丫丫

木虫 (正式写手)

[求助] 最近在做crispr,请问大家能否告知sgRNA怎么合成还是转录得到 已有4人参与

请问大家能否告知sgRNA怎么合成还是转录得到,另外在原核生物中能做吗?特异性序列多长?还有CRISPR-Cas9表达载体是买的还是自己构建的?刚接触这个课题,不懂,求大神讲解
回复此楼
一颗自由的心不知是被身体束缚还是梦想
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我是丫丫

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by pypsak at 2015-04-23 08:56:48
有两种方法:1,体外转录sgRNA+ tracrRNA,然后跟cas9蛋白同转化细菌;2,是构建适合你得菌的敲除质粒,主要是启动子这块需要考虑,但是质粒进去了你得考虑到质粒会一直存在细菌中。...

还有我目前设计的就是打算用第一种方法。多谢
一颗自由的心不知是被身体束缚还是梦想
10楼2015-04-24 09:59:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

maiduo

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你cre loxp不做了?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-04-14 14:06:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我是丫丫

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by maiduo at 2015-04-14 14:06:30
你cre loxp不做了?

??
一颗自由的心不知是被身体束缚还是梦想
3楼2015-04-14 18:48:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenma521

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
我是丫丫(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-29 18:41:51
sgRNA 是可以在合成引物的公司合成单链带上酶切位点,通过随机退火制备成带酶切位点的小片段再连接到载体上,然后再买一个相关的cas9质粒就可以了。

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-04-14 21:46:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +3 小蜗牛* 2026-04-16 3/150 2026-04-16 21:23 by Art1977
[考研] 化学070300 求调剂 +27 哈哈哈^_^ 2026-04-12 27/1350 2026-04-16 21:20 by SSVVV
[考研] 290求调剂 +23 luoziheng 2026-04-10 25/1250 2026-04-16 17:25 by 冰雪遇见猪
[考研] 一志愿华中农业071010,320求调剂 +13 困困困困坤坤 2026-04-14 15/750 2026-04-16 14:29 by zhouxiaoyu
[考研] 271求调剂 +35 2261744733 2026-04-11 37/1850 2026-04-16 13:16 by jiahl2024
[考研] 300求调剂 +10 橙a777 2026-04-15 10/500 2026-04-16 12:50 by maoqinghuijz
[考研] 0854调剂 +9 950824he@ 2026-04-09 9/450 2026-04-16 11:11 by noqvsozv
[考研] 初试324 中药学 一志愿天中医 求调剂 +4 李的Lucky 2026-04-10 4/200 2026-04-16 09:22 by fqwang
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +4 白云123456789 2026-04-13 4/200 2026-04-16 00:18 by 粉沁若尘
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +9 lzmk 2026-04-14 10/500 2026-04-15 20:02 by 学员JpLReM
[考研] 药学305求调剂 +7 玛卡巴卡boom 2026-04-11 7/350 2026-04-15 13:21 by 西北望—风沙
[考研] 211本科材料化工求调剂 +19 YHLAH 2026-04-11 23/1150 2026-04-14 22:25 by fenglj492
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 农学0904 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-11 4/200 2026-04-14 09:10 by zs92450
[考研] 339求调剂 +4 hanwudada 2026-04-12 4/200 2026-04-13 12:03 by 蓝云思雨
[考研] 346分,工科0854求调剂,专硕 +6 moser233 2026-04-12 7/350 2026-04-12 22:11 by fqwang
[考研] 求调剂,一志愿材料科学与工程985,365分, +8 材化李可 2026-04-11 10/500 2026-04-12 08:42 by 852137818
[考研] 本人女孩 +7 吼吼, 2026-04-10 9/450 2026-04-11 14:45 by ACS Nano——
[考研] 22408 352分求调剂0854类 +4 努力的夏末 2026-04-09 4/200 2026-04-11 09:57 by zhq0425
[考研] 中药学调剂 初试324 +4 洋甘菊、 2026-04-10 6/300 2026-04-11 09:41 by gong120082
信息提示
请填处理意见