[求助] EMSA蛋白浓度梯度升高，探针带有减弱，却看不到蛋白带，求助大家！ 已有3人参与

求教各位，我用的试剂盒是Roche的DIG Gel Shift 2nd Generation. 这个探针和这个蛋白是肯定结合了的，我之前做出来过，这次只是想做一个梯度进一步验证一下，实验条件（包括蛋白浓度的大概范围，胶浓度，电泳条件等）和以前也没什么区别，但却看不出蛋白带了（如图片1所示，泳道1只有探针，泳道2-7是探针+依次加量的蛋白，泳道8是探针+蛋白+过量竞争探针），之后又做了一次，提高了探针浓度，结果更糟糕（如图片2所示，泳道1只有探针，泳道2-7是探针+依次加量的蛋白，探针+蛋白+过量竞争探针的对照组没有截入图中）。请有经验的同学帮帮我，看看蛋白结合带跑成这样到底是什么原因，不胜感谢！ 图片1.png 图片2.png

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