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一月清弦

金虫 (小有名气)

[求助] BCA法测定蛋白浓度时,煮沸的蛋白和未煮沸的蛋白是否有差异? 已有2人参与

最近在做材料的蛋白(人血清白蛋白)吸附试验,利用BCA法做标准曲线时一般会配个大浓度的方便以后稀释(我是放在4°冰箱的),但是发现每次测定的结果变化都挺大的,后来听说蛋白质配成溶液后会降解,不知道这是不是测出的结果不稳定的原因啊?另外蛋白质粉末直接放在4°冰箱会不会降解啊?实在是不了解,请做过类似实验或者对蛋白了解的朋友帮帮忙解答下,不胜感激!!
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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一月清弦: 金币+5, 有帮助, 很谢谢你,这个问题已经找生工专业的人请教过了,现在解决了,不要嫌弃给的分少啊。 2015-04-15 13:56:45
蛋白配成溶液是较浓的相对稳定一些,但是也会有降解。做标准曲线的BSA通常是配成高浓度的母液,分装成小管,冻存在-20°C。
变性后的蛋白和未经变性的蛋白的确可能在吸收上有差异。你需要特别注意一下溶解样品的缓冲液的成分和浓度,你可以下载试剂盒中的说明查看哪些成分会对测定有影响。同时,可以在做标准曲线时加入与样品体积相同的缓冲液做对照。
2楼2015-04-12 10:11:53
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一月清弦

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2015-04-12 10:11:53
蛋白配成溶液是较浓的相对稳定一些,但是也会有降解。做标准曲线的BSA通常是配成高浓度的母液,分装成小管,冻存在-20°C。
变性后的蛋白和未经变性的蛋白的确可能在吸收上有差异。你需要特别注意一下溶解样品的缓 ...

你是说蛋白质如果是粉末状保存的话容易降解,配成溶液,放-20°冰箱会比粉末保存好一些吗?溶解样品用缓冲溶液吗,刚开始用的超纯水?
3楼2015-04-13 12:31:48
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
一月清弦: 金币+5, 有帮助, 恩恩,这个问题已经找做蛋白的人咨询过了,还是谢谢你。 2015-04-15 13:57:39
粉末4度是很难降解的,因为比较干燥,很稳定的,-20度存储高浓度的母液是为了方便配置和使用
科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
4楼2015-04-13 13:42:56
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