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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » BCA法测定蛋白浓度时，煮沸的蛋白和未煮沸的蛋白是否有差异？
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一月清弦

金虫 (小有名气)

[求助] BCA法测定蛋白浓度时，煮沸的蛋白和未煮沸的蛋白是否有差异？ 已有2人参与

最近在做材料的蛋白（人血清白蛋白）吸附试验，利用BCA法做标准曲线时一般会配个大浓度的方便以后稀释（我是放在4°冰箱的），但是发现每次测定的结果变化都挺大的，后来听说蛋白质配成溶液后会降解，不知道这是不是测出的结果不稳定的原因啊？另外蛋白质粉末直接放在4°冰箱会不会降解啊？实在是不了解，请做过类似实验或者对蛋白了解的朋友帮帮忙解答下，不胜感激！！
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1楼 2015-04-11 19:19:56
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
一月清弦: 金币+5, ★有帮助, 很谢谢你，这个问题已经找生工专业的人请教过了，现在解决了，不要嫌弃给的分少啊。 2015-04-15 13:56:45
蛋白配成溶液是较浓的相对稳定一些，但是也会有降解。做标准曲线的BSA通常是配成高浓度的母液，分装成小管，冻存在-20°C。
变性后的蛋白和未经变性的蛋白的确可能在吸收上有差异。你需要特别注意一下溶解样品的缓冲液的成分和浓度，你可以下载试剂盒中的说明查看哪些成分会对测定有影响。同时，可以在做标准曲线时加入与样品体积相同的缓冲液做对照。
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2楼2015-04-12 10:11:53
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一月清弦

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2015-04-12 10:11:53
蛋白配成溶液是较浓的相对稳定一些，但是也会有降解。做标准曲线的BSA通常是配成高浓度的母液，分装成小管，冻存在-20°C。
变性后的蛋白和未经变性的蛋白的确可能在吸收上有差异。你需要特别注意一下溶解样品的缓 ...

你是说蛋白质如果是粉末状保存的话容易降解，配成溶液，放-20°冰箱会比粉末保存好一些吗？溶解样品用缓冲溶液吗，刚开始用的超纯水？
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3楼2015-04-13 12:31:48
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
一月清弦: 金币+5, ★有帮助, 恩恩，这个问题已经找做蛋白的人咨询过了，还是谢谢你。 2015-04-15 13:57:39
粉末4度是很难降解的，因为比较干燥，很稳定的，-20度存储高浓度的母液是为了方便配置和使用
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
4楼2015-04-13 13:42:56
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